ELISA實驗血(xue)清(qing)樣(yang)本為什(shen)麽都(dou)需(xu)要(yao)稀釋?
每壹盒ELISA試(shi)劑(ji)盒裏面(mian)都(dou)有(you)壹份(fen)對應(ying)的說明(ming)書，而每壹份(fen)說明(ming)書裏都(dou)會有寫(xie)樣本和(he)稀釋(shi)液的稀釋比例(li)，為什(shen)麽樣本都(dou)需(xu)要(yao)稀釋呢?今天的文章(zhang)中，小(xiao)編將(jiang)為您分析：為何ELISA實驗血(xue)清(qing)樣(yang)本都(dou)需(xu)要(yao)稀釋?
在ELISA試(shi)劑(ji)盒實驗血(xue)清(qing)為什(shen)麽要(yao)稀釋？有兩個原(yuan)因(yin)：
1）競爭抑(yi)制(zhi)比較明(ming)顯，應(ying)稀(xi)釋競爭物(wu)；
2）以降(jiang)低(di)非特(te)異性反(fan)應(ying)，使特(te)異性的抗原(yuan)抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)充分體現(xian)出(chu)來(lai)。
血清(qing)稀(xi)釋用(yong)普(pu)通的PBS即可，可加1％的BSA，能(neng)有(you)效(xiao)降(jiang)低(di)ELISA本底(di)，當然(ran)如(ru)果(guo)妳嫌麻(ma)煩(fan)我(wo)覺(jiao)得用(yong)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)替(ti)代(dai)PBS關(guan)系(xi)也不大(da)。不(bu)管(guan)妳(ni)是(shi)用(yong)直(zhi)接競爭還是(shi)間(jian)接競爭，血(xue)清(qing)的稀釋倍數肯定(ding)要(yao)事先(xian)確定(ding)，但也(ye)不(bu)用(yong)壹點點，妳(ni)做(zuo)壹個預(yu)試(shi)驗(yan)即(ji)可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數，即(ji)妳(ni)的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣(yang)作(zuo)出(chu)來(lai)的曲線(xian)比較敏(min)感(gan)。
ELISA試(shi)劑(ji)盒實驗稀(xi)釋(shi)血清(qing)的步驟(zhou)：
先(xian)把(ba)蛋(dan)白稀釋(shi)壹定(ding)的倍數，比如(ru)說10倍、20倍稀釋(shi)（這樣(yang)可以大(da)體(ti)確定(ding)壹個參(can)數），將(jiang)抗原(yuan)進行壹系(xi)列(lie)稀釋(shi)包(bao)被(bei)微(wei)量(liang)反(fan)應(ying)板，再(zai)用(yong)壹定(ding)稀(xi)釋度的陽(yang)性參考(kao)血(xue)清(qing)和(he)陰性參考(kao)血(xue)清(qing)進行孵(fu)育後洗滌，再(zai)加酶結合物(wu)進行反(fan)應(ying)，經(jing)孵(fu)育洗滌後，加底(di)物(wu)溶液顯(xian)色(se)，終止(zhi)反(fan)應(ying)後分別測(ce)定(ding)O.D值(zhi)，選擇(ze)O.D值(zhi)≥1.0的那(na)個抗(kang)原(yuan)稀(xi)釋(shi)度為zui適包(bao)被(bei)濃(nong)度。壹般(ban)總是(shi)要(yao)選擇那(na)個O.D值(zhi)稍大(da)於(yu)1.0，而不選(xuan)擇(ze)小(xiao)於1.0的抗原(yuan)濃(nong)度。陰性參考(kao)血(xue)清(qing)O.D值(zhi)要(yao)求(qiu)<0.1-0.2。也(ye)就(jiu)是(shi)要(yao)求(qiu)陽(yang)性參考(kao)血(xue)清(qing)和(he)陰性參考(kao)血(xue)清(qing)的O.D值(zhi)有明(ming)顯差(cha)別。