XL1-Blue 感(gan)受(shou)態細(xi)胞100ul*10

XL1-Blue 感(gan)受(shou)態細(xi)胞100ul*10操(cao)作方(fang)法（以下(xia)操(cao)作均(jun)按(an)無菌(jun)條(tiao)件的標準進行）
1 取(qu)感(gan)受(shou)態細(xi)胞置於(yu)冰(bing)浴(yu)中，如(ru)需(xu)分(fen)裝(zhuang)可將剛(gang)融(rong)化細(xi)胞懸液分裝(zhuang)到無菌(jun)預(yu)冷(leng)的離心(xin)管中，置於(yu)冰(bing)浴(yu)中。
●  壹次轉(zhuan)化感受(shou)態細(xi)胞的建(jian)議(yi)用(yong)量為50-100 μl，可以(yi)根據(ju)實際(ji)情(qing)況分(fen)裝(zhuang)使(shi)用。應(ying)註意所用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不要(yao)超過(guo)感(gan)受態細(xi)胞懸液體(ti)積(ji)的十分(fen)之壹。
以下(xia)實驗以100 μl感受態細(xi)胞為例。
XL1-Blue 感受(shou)態細(xi)胞100ul*102 向(xiang)感(gan)受(shou)態細(xi)胞懸液中加入(ru)目(mu)的DNA（100 μl 的感受(shou)態細(xi)胞能(neng)夠被1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質粒DNA 所飽(bao)和），輕輕旋轉離心(xin)管以(yi)混勻內(nei)容(rong)物，在(zai)冰(bing)浴(yu)中靜置30 分鐘(zhong)。
3 將離(li)心(xin)管置於(yu)42℃水浴(yu)中放(fang)置60-90 秒，然(ran)後(hou)快速將管(guan)轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰(bing)浴(yu)中，使(shi)細(xi)胞冷(leng)卻2-3 分鐘(zhong)，該(gai)過(guo)程(cheng)不要(yao)搖動(dong)離心(xin)管。
4 向(xiang)每個(ge)離心(xin)管中加入(ru)900 μl 無菌(jun)的SOC 或(huo)LB 培(pei)養基(ji)（不含抗生素(su)）， 混(hun)勻後(hou)置於(yu)37℃搖床(chuang)振蕩(dang)培(pei)養1 小時(shi)（160-220 轉/分(fen)鐘(zhong)），目(mu)的是使(shi)質粒上(shang)相關的抗性(xing)標記(ji)基(ji)因(yin)表(biao)達，使(shi)菌(jun)體(ti)復蘇(su)。
5 將離(li)心(xin)管內(nei)容(rong)物混(hun)勻，吸取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化的感受(shou)態細(xi)胞加到(dao)含(han)相應(ying)抗(kang)生素(su)的SOB 或(huo)LB 固(gu)體(ti)瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養基(ji)上(shang)，用(yong)無菌(jun)的彎(wan)頭(tou)玻棒輕輕的將細(xi)胞均(jun)勻(yun)塗(tu)開。將平(ping)板(ban)置於(yu)室溫直(zhi)至(zhi)液(ye)體(ti)被吸(xi)收(shou)，倒(dao)置平(ping)板(ban)，37℃培(pei)養12-16 小時(shi)。
●  塗布用(yong)量(liang)可根據(ju)具體(ti)實驗(yan)來(lai)調整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化的DNA 總(zong)量(liang)較多，可取(qu)更(geng)少(shao)量(liang)轉(zhuan)化(hua)產物塗(tu)布平(ping)板(ban)；反之(zhi)，如(ru)轉(zhuan)化的DNA 總(zong)量(liang)較少(shao)，可取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產物塗(tu)布平(ping)板(ban)。如果預(yu)計(ji)的克(ke)隆(long)較少(shao)，可通(tong)過(guo)離心(xin)（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）後(hou)吸除部(bu)分培(pei)養液(ye)，懸浮菌(jun)體(ti)後將其(qi)塗(tu)布於(yu)壹個(ge)平(ping)板(ban)中。（塗(tu)布剩余(yu)的菌(jun)液可置於(yu)4℃保(bao)存，如果次日的轉化(hua)菌(jun)落數過少(shao)可以(yi)將剩下(xia)的菌(jun)液再(zai)塗布新的培(pei)養板(ban)）
XL1-Blue 感(gan)受態細(xi)胞100ul*10註(zhu)意(yi)事(shi)項
1. 感受(shou)態細(xi)胞應(ying)保(bao)存在(zai) -70℃，不可多(duo)次凍(dong)融(rong)和放(fang)置時(shi)間過(guo)長，以避免(mian)降低感(gan)受(shou)態細(xi)胞的轉化(hua)效(xiao)率。
2. 進行轉化操(cao)作時(shi)，應根據(ju)相應(ying)溫度及(ji)無菌(jun)條(tiao)件的要(yao)求進行。
3 為防止轉(zhuan)化實(shi)驗不成(cheng)功，可以(yi)保(bao)留部(bu)分(fen)連(lian)接反應(ying)液(ye)，以(yi)重新轉(zhuan)化，將損(sun)失(shi)降到低。
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