DH5αλpir 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*20

操(cao)作方(fang)法(fa)DH5αλpir 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*20（以下操(cao)作均(jun)按(an)無菌(jun)條件(jian)的標(biao)準進行(xing)）
1 取(qu)感(gan)受(shou)態細胞(bao)置(zhi)於冰(bing)浴(yu)中，如需(xu)分(fen)裝可將剛融(rong)化細胞(bao)懸(xuan)液分(fen)裝到無菌(jun)預(yu)冷(leng)的離心(xin)管中(zhong)，置(zhi)於冰(bing)浴(yu)中。
●  壹(yi)次轉化感(gan)受(shou)態細胞(bao)的建(jian)議(yi)用量為50-100 μl，可(ke)以根(gen)據(ju)實際情況分(fen)裝使(shi)用。應(ying)註(zhu)意所(suo)用(yong)DNA 體(ti)積不(bu)要超(chao)過感(gan)受(shou)態細胞(bao)懸(xuan)液體(ti)積的十(shi)分(fen)之(zhi)壹(yi)。
以下實驗(yan)以100 μl感(gan)受(shou)態細胞(bao)為(wei)例(li)。
DH5αλpir 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*202 向(xiang)感(gan)受(shou)態細胞(bao)懸(xuan)液中(zhong)加(jia)入目(mu)的DNA（100 μl 的感(gan)受(shou)態細胞(bao)能夠被1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質(zhi)粒DNA 所(suo)飽(bao)和），輕輕旋(xuan)轉離心(xin)管以混勻內容物，在(zai)冰浴(yu)中靜(jing)置(zhi)30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將(jiang)離心(xin)管置(zhi)於42℃水(shui)浴(yu)中放(fang)置(zhi)60-90 秒，然(ran)後快速(su)將(jiang)管轉移到(dao)冰浴(yu)中，使(shi)細胞(bao)冷(leng)卻(que)2-3 分(fen)鐘(zhong)，該(gai)過程(cheng)不(bu)要搖(yao)動(dong)離心(xin)管。
4 向(xiang)每個(ge)離心(xin)管中(zhong)加(jia)入(ru)900 μl 無菌(jun)的SOC 或LB 培養基（不(bu)含(han)抗(kang)生素）， 混勻後置(zhi)於37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩培養1 小時(shi)（160-220 轉/分(fen)鐘(zhong)），目(mu)的是使(shi)質(zhi)粒上(shang)相(xiang)關(guan)的抗性(xing)標(biao)記(ji)基因(yin)表達(da)，使(shi)菌體(ti)復蘇(su)。
5 將離心(xin)管內容物混勻，吸(xi)取(qu)100 μl 已(yi)轉化的感(gan)受(shou)態細胞(bao)加(jia)到含相(xiang)應(ying)抗(kang)生素的SOB 或LB 固(gu)體(ti)瓊脂(zhi)培養基上(shang)，用無菌(jun)的彎(wan)頭玻(bo)棒輕(qing)輕的將細胞(bao)均(jun)勻塗(tu)開。將平板(ban)置(zhi)於室(shi)溫(wen)直至(zhi)液體(ti)被吸(xi)收(shou)，倒(dao)置(zhi)平板(ban)，37℃培養12-16 小時(shi)。
●  塗布用量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)具(ju)體(ti)實驗(yan)來(lai)調整。如轉化的DNA 總(zong)量較(jiao)多，可(ke)取(qu)更(geng)少(shao)量(liang)轉化產(chan)物塗布平板(ban)；反之，如轉化的DNA 總(zong)量較(jiao)少(shao)，可(ke)取(qu)200-300 μl 轉化產(chan)物塗布平板(ban)。如果(guo)預(yu)計(ji)的克隆(long)較少(shao)，可(ke)通(tong)過離心(xin)（4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong)）後吸除(chu)部分(fen)培養液，懸(xuan)浮(fu)菌體(ti)後將其(qi)塗布於壹(yi)個(ge)平板(ban)中(zhong)。（塗布剩余(yu)的菌液可(ke)置(zhi)於4℃保存(cun)，如果(guo)次日的轉化菌落(luo)數過少(shao)可(ke)以將剩下(xia)的菌液再(zai)塗(tu)布新(xin)的培養板(ban)）
DH5αλpir 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*20註(zhu)意事項(xiang)
1. 感(gan)受(shou)態細胞(bao)應(ying)保存(cun)在(zai) -70℃，不(bu)可(ke)多(duo)次(ci)凍融和放置(zhi)時(shi)間過長，以避(bi)免(mian)降(jiang)低(di)感(gan)受(shou)態細胞(bao)的轉化效率。
2. 進行(xing)轉化操(cao)作時(shi)，應(ying)根(gen)據(ju)相(xiang)應(ying)溫(wen)度(du)及無菌(jun)條件(jian)的要求(qiu)進行(xing)。
3 為防止轉化實驗(yan)不(bu)成(cheng)功(gong)，可(ke)以保留(liu)部(bu)分(fen)連接反應(ying)液，以重新(xin)轉化，將損(sun)失降(jiang)到(dao)低。
以下是的相(xiang)關(guan)產(chan)品：

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