更(geng)新(xin)時間(jian):2025-11-29
DH5αλpir 感(gan)受態(tai)細胞100ul*100菌(jun)株(zhu)壹(yi)種(zhong)常用於(yu)質(zhi)粒克(ke)隆的菌(jun)株(zhu)。其φ80lacZΔM15基(ji)因(yin)的產(chan)物可與(yu)pUC載體編(bian)碼(ma)的(de)b-半乳糖苷酶(mei)氨(an)基(ji)端實(shi)現(xian)a互補,可(ke)用於(yu)藍(lan)白(bai)斑篩(shai)選。recA1和endA1 的突變(bian)有利於(yu)克(ke)隆(long)DNA 的(de)穩(wen)定(ding)和高純(chun)度(du)質粒DNA的(de)提取(qu)。
DH5αλpir 感(gan)受態(tai)細胞100ul*100操(cao)作方法(以(yi)下操(cao)作均按無菌(jun)條(tiao)件的(de)標準進行)
1 取(qu)感(gan)受態(tai)細胞置(zhi)於(yu)冰浴(yu)中,如(ru)需(xu)分(fen)裝可(ke)將(jiang)剛融化(hua)細胞懸液分(fen)裝到(dao)無菌(jun)預(yu)冷(leng)的(de)離心(xin)管中,置(zhi)於(yu)冰浴(yu)中。
● 壹(yi)次轉(zhuan)化(hua)感(gan)受態(tai)細胞的(de)建議用量(liang)為50-100 μl,可(ke)以根據實際情(qing)況(kuang)分(fen)裝使(shi)用(yong)。應註意所用DNA 體積(ji)不(bu)要(yao)超(chao)過(guo)感(gan)受態(tai)細胞懸液體積(ji)的(de)十分(fen)之壹(yi)。
以(yi)下(xia)實(shi)驗以(yi)100 μl感(gan)受態(tai)細胞為例(li)。
DH5αλpir 感(gan)受態(tai)細胞100ul*1002 向(xiang)感(gan)受態(tai)細胞懸液中加(jia)入目的(de)DNA(100 μl 的感(gan)受態(tai)細胞能夠(gou)被1 ng 超(chao)螺(luo)旋質粒DNA 所飽和),輕(qing)輕(qing)旋轉(zhuan)離心(xin)管以混(hun)勻內容物(wu),在冰浴(yu)中靜(jing)置(zhi)30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將(jiang)離心(xin)管置(zhi)於(yu)42℃水(shui)浴(yu)中放置(zhi)60-90 秒,然(ran)後快速將(jiang)管轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰浴(yu)中,使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分(fen)鐘(zhong),該過(guo)程(cheng)不(bu)要(yao)搖(yao)動離心(xin)管。
4 向每個(ge)離心(xin)管中加(jia)入900 μl 無菌(jun)的(de)SOC 或(huo)LB 培養基(ji)(不(bu)含抗生素), 混(hun)勻後置(zhi)於(yu)37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩培養1 小(xiao)時(160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)),目的(de)是使(shi)質(zhi)粒上相(xiang)關(guan)的抗性標(biao)記基(ji)因(yin)表達,使(shi)菌(jun)體復(fu)蘇(su)。
5 將(jiang)離心(xin)管內容物(wu)混(hun)勻,吸(xi)取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的感(gan)受態(tai)細胞加(jia)到(dao)含相(xiang)應抗生素的(de)SOB 或(huo)LB 固體瓊脂培養基(ji)上,用(yong)無菌(jun)的(de)彎頭玻棒(bang)輕(qing)輕(qing)的將(jiang)細胞均(jun)勻塗(tu)開(kai)。將(jiang)平(ping)板(ban)置(zhi)於(yu)室溫直至(zhi)液體被吸(xi)收(shou),倒置(zhi)平(ping)板(ban),37℃培養12-16 小(xiao)時。
● 塗(tu)布(bu)用(yong)量(liang)可(ke)根據具(ju)體實(shi)驗來(lai)調整。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量(liang)較多(duo),可取(qu)更(geng)少(shao)量(liang)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban);反(fan)之,如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量(liang)較少(shao),可取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban)。如(ru)果(guo)預(yu)計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較少(shao),可通(tong)過(guo)離心(xin)(4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong))後吸(xi)除(chu)部分(fen)培養液,懸浮(fu)菌體後(hou)將(jiang)其塗(tu)布(bu)於(yu)壹(yi)個(ge)平(ping)板(ban)中。(塗(tu)布(bu)剩(sheng)余(yu)的菌(jun)液(ye)可(ke)置(zhi)於(yu)4℃保存(cun),如(ru)果(guo)次日的轉(zhuan)化(hua)菌落(luo)數(shu)過(guo)少可以將(jiang)剩下(xia)的菌(jun)液再塗(tu)布(bu)新(xin)的(de)培養板)
DH5αλpir 感(gan)受態(tai)細胞100ul*100註(zhu)意事項
1. 感(gan)受態(tai)細胞應保存(cun)在 -70℃,不(bu)可多(duo)次凍(dong)融和放置(zhi)時間(jian)過(guo)長,以避免降(jiang)低(di)感(gan)受態(tai)細胞的(de)轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)。
2. 進(jin)行轉(zhuan)化(hua)操(cao)作時,應根據相(xiang)應溫度(du)及無菌(jun)條(tiao)件的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行。
3 為防止轉(zhuan)化(hua)實驗不(bu)成(cheng)功,可(ke)以(yi)保留部分(fen)連接(jie)反(fan)應液,以重新轉(zhuan)化(hua),將(jiang)損失(shi)降到(dao)低(di)。
以下(xia)是的(de)相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin):
進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)4(MMP-4)ELISA試(shi)劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)4(MMP-4)ELISA試(shi)劑盒(he)報(bao)價(jia)
兔(tu)子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)9(MMP-9)ELISA試(shi)劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit matrix metalloproteinase 9,MMP-9 ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)9(MMP-9)ELISA試(shi)劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)9(MMP-9)ELISA試(shi)劑盒(he)報(bao)價(jia)
兔(tu)子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)因(yin)子1(TIMP-1)ELISA試(shi)劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)因(yin)子1(TIMP-1)ELISA試(shi)劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)基(ji)質(zhi)金屬蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)因(yin)子1(TIMP-1)ELISA試(shi)劑盒(he)報(bao)價(jia)
兔(tu)子(zi)甲(jia)狀腺素(T4)ELISA試(shi)劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit thyroxine,T4 ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)甲(jia)狀腺素(T4)ELISA試(shi)劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)甲(jia)狀腺素(T4)ELISA試(shi)劑盒(he)報(bao)價(jia)
兔(tu)子(zi)堿(jian)性成(cheng)纖(xian)維細胞生長(chang)因(yin)子(bFGF)ELISA試(shi)劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit basic fibroblast growth factor,bFGF ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)堿(jian)性成(cheng)纖(xian)維細胞生長(chang)因(yin)子(bFGF)ELISA試(shi)劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)堿(jian)性成(cheng)纖(xian)維細胞生長(chang)因(yin)子(bFGF)ELISA試(shi)劑盒(he)報(bao)價(jia)
兔(tu)子(zi)巨(ju)噬細胞炎(yan)性(xing)蛋白(bai)5(MIP-5)ELISA試劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)巨(ju)噬細胞炎(yan)性(xing)蛋白(bai)5(MIP-5)ELISA試劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)巨(ju)噬細胞炎(yan)性(xing)蛋白(bai)5(MIP-5)ELISA試劑盒(he)報(bao)價(jia)
兔(tu)子(zi)可(ke)溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試(shi)劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit soluble E-selectin,sE-selectin ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)可(ke)溶性E選(xuan)擇素(sE-selectin)ELISA試(shi)劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試(shi)劑盒(he)報(bao)價(jia)
DH5αλpir 感(gan)受態(tai)細胞100ul*100 兔(tu)子可溶性(xing)細胞間(jian)粘附分(fen)子(zi)1(sICAM-1)ELISA試劑盒(he) :英文(wen)名(ming)稱; rabbit Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit 購買(mai)我公(gong)司(si)ELISA試劑盒(he)保證質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重復性好(hao)等(deng)優點(dian)已(yi)經(jing)得到(dao)廣大客戶(hu)的(de)認(ren)可,您(nin)可(ke)放(fang)心(xin),且我(wo)司(si)有專門的售後部門對您(nin)進(jin)行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 兔(tu)子(zi)可(ke)溶性細胞間(jian)粘附分(fen)子(zi)1(sICAM-1)ELISA試劑盒(he)廠(chang)家(jia) 兔子(zi)可溶性細胞間(jian)粘附分(fen)子(zi)1(sICAM-1)ELISA試劑盒(he)報(bao)價(jia)