HCC-1171細胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止消化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍存處理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體(ti)操(cao)作步驟以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸液的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有細胞懸液加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第二天換液(ye)並檢查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞密度達 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含(han)鈣、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤(run)所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然後在(zai)顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速拿回操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。輕輕打(da)勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液按(an)1:2比(bi)例分到新的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待細(xi)胞生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可進行細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細胞及細(xi)胞培養(yang)液，裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司正(zheng)在出(chu)售的(de)產(chan)品：

組織(zhi)半-13（CASPASE-13）活性比色法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

15％蛋白(bai)電泳分離(li)預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液(ye)

果(guo)蠅萃(cui)取物(wu)制備(bei)試劑盒(he)

HISTONE H3蛋白(bai)表(biao)達ELISA定量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

植物(wu)源性食品腰(yao)果(guo)（cashew）基(ji)因(yin)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

10倍PIPES濃(nong)縮(suo)緩沖溶液

細胞糖原(yuan)磷(lin)酸化(hua)酶(mei)b（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE）活性

細胞內氧(yang)化(hua)應(ying)激活性氧(yang)（ROS）初級綠(lv)色熒光測(ce)定試劑盒(he)

石蠟(la)切片(pian)神(shen)經(jing)元(yuan)胞漿尼(ni)斯(si)（NISSL）染色試(shi)劑(ji)盒(he)

6-OH-MTHβC高效(xiao)液相(xiang)色譜電化學定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

?COLLAGEN III蛋白(bai)表(biao)達西方雜(za)交(jiao)分析試(shi)劑盒(he)

茶葉(ye)U（S-Methylmethionine）比色法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

冰(bing)凍切片(pian)組(zu)織COLLAGEN I蛋白(bai)表(biao)達熒光顯(xian)微鏡檢測(ce)試劑盒(he)

細胞基(ji)質金(jin)屬（MMP-2）琥珀(po)酰(xian)明膠(jiao)法比(bi)色定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

動(dong)物(wu)硬組(zu)織線(xian)粒體(ti)粗提分(fen)離(li)試劑(ji)盒(he)

張力(li)蛋白(bai)4抗(kang)體(ti)

肝(gan)癌衍生(sheng)生長因(yin)子(zi)/高遷(qian)移(yi)率族(zu)蛋白(bai)1樣蛋白(bai)2抗(kang)體(ti)

缺氧(yang)誘導(dao)基(ji)因(yin)2蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

KIAA0232蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

細胞角(jiao)蛋白(bai)5抗(kang)體(ti)

α-s1酪蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

萊(lai)克多巴(ba)胺(an)單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

HCC-1171細胞ATP依賴RNA解(jie)旋酶(mei)DDX42抗(kang)體(ti)

鋅指(zhi)蛋白(bai)ZBTB7C抗(kang)體(ti)

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培養液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血清比(bi)例、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子(zi)等，確保細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件(jian)不壹(yi)致而(er)導(dao)致細胞出現(xian)問(wen)題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分細胞由(you)於溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀察(cha)好細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消(xiao)化(hua)，懸浮細胞直接(jie)混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細胞，並接(jie)種到新的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收到細(xi)胞後前(qian) 3 天各拍幾張細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司技術部溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解決。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養基(ji)) 不能(neng)再用(yong)來培養細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞培 養(yang)條件(jian)新配(pei)制的(de)培養(yang)基(ji)來培養細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。