GM20942細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加入培(pei)養液終(zhong)

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處理僅供參考，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨產品(pin)說(shuo)明書為主。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去上清液，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後吹勻(yun)。然後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入含(han)適量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天換液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培(pei)養液後吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿(min)中或者瓶(ping)中，置(zhi)於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀態良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培養註意事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述現象(xiang) 發生請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致，若由於培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹致而導致細(xi)胞(bao)出(chu)現問題(ti)，責(ze)任由 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到(dao)新的(de)培養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中，置(zhi)於培(pei)養箱中進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於和(he)我司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的技術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不(bu)能再用來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換用按(an)照說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的培養基(ji)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹次(ci)傳代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

組織(zhi)半(ban)-8（CASPASE-8）活(huo)性比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

病毒HRP標(biao)記制(zhi)備(bei)試(shi)劑(ji)盒(he)

線蟲同步(bu)化(hua)生長培養試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)DAP KINASE蛋(dan)白表達(da)比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

動物源性食(shi)品(pin)豬源(yuan)基因(yin)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

DAPI復染試(shi)劑(ji)盒(he)

組織(zhi)絡磷酸酶(mei)（TP）活(huo)性熒光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

動物組織(zhi)超(chao)氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）亞型制備(bei)試(shi)劑(ji)盒(he)

Anti-neurofilament immunostaining or silver staining

PGE1

冰凍(dong)切(qie)片(pian)組織(zhi)αSMA蛋(dan)白表達(da)NBT顯(xian)色光學(xue)顯(xian)微鏡(jing)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

動物組織(zhi)N-乙酰轉移酶(mei)2（NAT2）活(huo)性比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

βAMYLOID蛋(dan)白免疫(yi)共沈(chen)澱(dian)分(fen)析(xi)試(shi)劑(ji)盒(he)

基質(zhi)金(jin)屬（MMP）酪(lao)譜(pu)法（casein-zymography）

線粒體內膜(mo)功(gong)能/膜電(dian)位(wei)紅色熒光(guang)（TMRM）測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)

粘(zhan)附分(fen)子相(xiang)關蛋(dan)白a1抗體

甘油磷酸二(er)酯(zhi)酶(mei)磷酸結(jie)構(gou)域4抗體

全合(he)成(cheng)酶(mei)抗(kang)體

Kelch樣蛋(dan)白38抗體

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋(dan)白24抗體

α1-chimaerin蛋(dan)白抗體

辣(la)根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)標(biao)記的(de)SARS病毒核(he)衣(yi)殼(ke)蛋(dan)白單克(ke)隆(long)抗(kang)體

GM20942細(xi)胞(bao)ATP結(jie)合(he)盒(he)蛋(dan)白家族GCN20F家族1抗體

鋅(xin)指蛋(dan)白BED4抗體