B16-F10小(xiao)鼠(shu)黑(hei)色素(su)瘤(liu)細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究使(shi)用、不(bu)得用於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期(qi)保(bao)存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接放(fang)入(ru)-80℃。

壹、商(shang)品介(jie)紹：

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以隨貨(huo)產(chan)品說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或將細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳代：如(ru)果細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液浸潤所有細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而定），然後(hou)在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞大部分(fen)變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存(cun)液，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意凍存(cun)管做好(hao)標識。將凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位(wei)置以便下次拿取。

公(gong)司正(zheng)在出售的產品：

大鼠(shu)子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠(shu)脂(zhi)蛋白(bai)脂(zhi)酶(LPL)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Rat IgG/RBITC 羅丹(dan)明(ming)標記(ji)大鼠(shu)IgG(細(xi)胞流式同(tong)型(xing)對照) 0.3ml

LRRN5： 富(fu)含亮(liang)酸重(zhong)復神經元5抗(kang)體 SK-MEL-1, 人(ren)皮(pi)膚(fu)黑(hei)色素(su)瘤(liu)細(xi)胞 白(bai)血病細(xi)胞,CEM細(xi)胞 SW579(人(ren)甲(jia)狀腺(xian)癌(ai)細(xi)胞)

ASGR2 Others Human 人(ren) ASGR2 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 大鼠(shu)脂(zhi)蛋白(bai)脂(zhi)酶(LIPD)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Avidin/FITC 熒光素(su)標記(ji)親合(he)素 0.1ml

Lipophilin B： 親脂(zhi)性(xing)蛋白(bai)B抗(kang)體 正(zheng)常大鼠(shu)腎細(xi)胞(EGF受(shou)體(ti)陽(yang)性(xing));NRK49F

KU812人(ren)外周(zhou)血(xue)嗜堿性(xing)白(bai)血病細(xi)胞 Human peripheral blood KU812 basophilic leukemia cells IMDM培(pei)養(yang)基(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)脂(zhi)蛋白(bai)脂(zhi)肪酶(mei)(LPL)ELISA試劑(ji)盒(he) Streptavidin/FITC 熒光素(su)標記(ji)鏈(lian)黴(mei)親和(he)素 0.3ml

HPV16 E6 + HPV18 E6： 人(ren)類(lei)狀瘤(liu)病毒(du)16/18 E6抗(kang)體 GPC3 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

原代(dai)神(shen)經膠質(zhi)細(xi)胞特(te)制(zhi)無(wu)血(xue)清(qing)添加(jia)劑(ji)Many types of cells包(bao)裝：1ml 人(ren)抗(kang)線粒(li)體抗(kang)體M2亞(ya)型(xing)(AMA-M2)ELISA試劑(ji)盒(he) GLUT4(Glucose transporter type 4) 葡萄糖(tang)轉(zhuan)運(yun)蛋白(bai)4(抗(kang)原) 0.5mg

HA tag： HA tag標簽抗(kang)體 狗(gou)腎細(xi)胞隆突(tu)型(xing);MDCK superdome T細(xi)胞，CTLL-2細(xi)胞 RTE細(xi)胞，大鼠(shu)氣(qi)管上(shang)皮細(xi)胞

NCR1 Others Rat 大鼠(shu) NCR1 / NK-p46 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 人(ren)抗(kang)線粒(li)體抗(kang)體(AMA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) GIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素(su)抑制(zhi)肽(tai)(抗(kang)原) 0.5mg

HSL/LIPE： 荷爾蒙(meng)敏感(gan)脂(zhi)肪酶(mei)抗(kang)體 MDA-MB-231(ATCC來(lai)源(yuan)), 人(ren)癌(ai)細(xi)胞

B16-F10小鼠(shu)黑(hei)色素(su)瘤(liu)細(xi)胞HCC-9204 肝癌(ai) 大鼠(shu)甲腺(xian)原(yuan)酸(suan)脫酶Ⅱ(DIO2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) gp210(Human Anti-glucoprotein 210)  人(ren)抗(kang)核膜(mo)糖(tang)蛋白(bai)210抗(kang)體 PT-67細(xi)胞，病(bing)毒(du)轉(zhuan)染(ran)小鼠(shu)細(xi)胞 人(ren)肺巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的高轉(zhuan)移亞(ya)系,PG-BE1細(xi)胞 腸(chang)微(wei)血管(guan)內(nei)皮細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次方(1ml)

HA Others H5N1 甲型(xing)流感(gan) H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 大鼠(shu)甲腺(xian)原(yuan)酸(suan)脫酶Ⅰ(DIO1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) LC1(Human anti-liver cytosolantibody type 1)  人(ren)抗(kang)肝細(xi)胞胞質(zhi)1型(xing)抗(kang)體 CL-0283Ishikawa(人(ren)子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

293 [HEK-293]人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞 293 human embryonic kidney cell line [HEK-293] DMEM+10% FBS 大鼠(shu)甲胎蛋白(bai)(αFP)ELISA試劑(ji)盒(he) iFABP  大鼠(shu)腸脂(zhi)肪酸(suan)結(jie)合(he)蛋白(bai) 96T

PATZ1： 轉(zhuan)錄(lu)調(tiao)節(jie)因(yin)子(zi)MAZR抗(kang)體 TACSTD2 Others Human 人(ren) OP2 / TACSTD2 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

人(ren)胚(pei)胎心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)樣(yang)細(xi)胞;HEH2 大鼠(shu)甲胎蛋白(bai)(AFP)ELISA試劑(ji)盒(he) MC Ab(Mouse melanocyte antibody)  小鼠(shu)黑(hei)色素(su)細(xi)胞抗(kang)體 狗(gou)腎細(xi)胞隆突(tu)型(xing);MDCK superdome

三、培養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有漏液、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所用培養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問題(ti)，責(ze)任由 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便於和(he)我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流。由於運(yun)輸(shu)的原因，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會(hui)出現(xian)不穩(wen)定的情況，請及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告知細(xi)胞 的具體情況，以便我們(men)的技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研使用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按照說明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配制(zhi)的培養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。