B16小(xiao)鼠黑色素(su)瘤細胞

公司產品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入 5ml 培養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕吹打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸，然後按(an) 1:2 比例進行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入培養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液氮中進行長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放(fang)入-80℃。

壹、商品(pin)介紹：

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅(jin)供參考(kao)，具體操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將含有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解凍(dong)，加4 mL培養基混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹勻。然後將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入含適(shi)量培(pei)養基的培養瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如果細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所有細胞，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞消(xiao)化(hua)情況，若細胞大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培養基終止消化(hua)。輕輕(qing)打勻後裝入無菌離心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養基的新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置於培養箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進行細胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入無菌離心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量(liang)加入無血(xue)清細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉入液氮灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

公司正(zheng)在出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

FGF1 Protein Human 重組(zu)人 aFGF / FGF1 蛋白 大(da)鼠脂蛋脂酶(mei)A2(Lp-PL-A2)ELISA 試劑盒 Avidin/RBITC 羅丹(dan)明(ming)標記(ji)親(qin)合素(su) 0.1ml

Listeriolysin： 李斯(si)特(te)菌溶胞素(su)抗體 IL3 Others Rat 大(da)鼠 IL3 / ierleukin 3 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

大(da)鼠卵(luan)巢顆(ke)粒(li)細胞培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠脂蛋白關聯0脂(zhi)酶(mei)A2(LpPLA2)ELISA試劑盒 Protein A/RBITC 羅丹(dan)明(ming)標記(ji)蛋白A 0.3ml

LCMT1： 亮(liang)酸羧(suo)基甲基轉移(yi)酶(mei)1抗體 A549, 人肺癌細胞系(xi) T細胞白血(xue)病(bing)細胞,HPB-ALL細胞 RKO(結(jie)腸(chang)腺癌細胞)

BPI Others Human 人 BPI 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照) 大(da)鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 Bovine IgG/RBITC 羅丹(dan)明(ming)標記(ji)IgG 0.3ml

HIPK3： Fas相互作(zuo)用(yong)蛋白激酶(mei)3抗體 人正(zheng)常上(shang)皮(pi)細胞;MCF 10A

RBL-1(大(da)鼠嗜堿(jian)性粒(li)細胞性(xing)白血(xue)病(bing)細胞) 5×106cells/瓶×2 人(ren)抗唾液(ye)腺(xian)導(dao)管(guan)組(zu)織(zhi)抗體(SDA)ELISA 試劑盒 Annexin A 膜(mo)粘連蛋白 A抗原(yuan) 0.5mg

HHV8 ORF50： 人類皰(pao)疹病(bing)毒8抗體 TGFB1 Others Mouse 小(xiao)鼠 TGF-beta 1 / TGFB1 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

U-2 OS人骨肉(rou)瘤細胞 U-2 human osteosarcoma cell line OS McCoy's 5A+10%FBS 人(ren)抗脫(tuo)氧(yang)核(he)糖核(he)蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA 試劑盒 G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein) G蛋白(鳥(niao)苷(gan)酸結(jie)合蛋白)(抗原(yuan)) 0.5mg

Phospho-HSP27 (Ser82)： 0酸化(hua)熱(re)休克(ke)蛋白27抗體 犬(quan)腎(shen)細胞;MDCK/IgR BALB/C小(xiao)鼠胚(pei)成纖(xian)維細胞，BALB/3T3細胞 RYTF細胞，兔(tu)眼(yan)Tenon's囊(nang)成纖(xian)維細胞

B16小(xiao)鼠黑色素(su)瘤細胞SDC4 Others Mouse 小(xiao)鼠 Syndecan-4 / SDC4 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照) 大(da)鼠己(ji)糖激(ji)酶(mei)1(HK1)ELISA試劑盒 DPP IV (Mouse dipeptidyl peptldase IV )  小(xiao)鼠二(er)肽(tai)基肽(tai)酶(mei)Ⅳ 96T

P4HTM： 脯酸水(shui)解酶(mei)4抗體 CL-0273ECV-304(人臍(qi)靜脈(mai)內皮(pi)細胞)5×106cells/瓶×2

293 Cells, low passage人胚(pei)腎細胞 293 Cells, low and passage in human embryo kidney cell 人(ren)胚(pei)腎細胞 大(da)鼠己(ji)糖激(ji)酶(mei)(HK)ELISA試劑盒 MMP-5  大(da)鼠基質金屬蛋白酶(mei)5 96T

PHAPI2： 酸性(xing)核(he)0蛋白32家族B抗體 RK3 Others Human 人 kC / RK3 人(ren)細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

人胚(pei)肺成纖(xian)維細胞;MRC-5 大(da)鼠己(ji)糖激(ji)酶(mei)(HK)ELISA 試劑盒 ATG(Human anti-thymocyte globulin)  人抗胸腺(xian)細胞球(qiu)蛋白 96T

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首先(xian)觀察細胞瓶是否完(wan)好(hao)，培養(yang)液是否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請及時(shi)和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說(shuo)明書，了解細胞相(xiang)關信息(xi)，如細胞形(xing)態(tai)、所用培養(yang)基、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致細胞出(chu)現(xian)問題，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細胞瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問題，部分(fen)細胞由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞直接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基重懸 細胞，並(bing)接種到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培養箱中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條件的培養(yang)基用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我司技術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因，個別(bie)敏感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定(ding)的情(qing)況，請及時(shi)和(he)我們(men)聯系(xi)，告(gao)知細胞 的(de)具體情況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問題解決(jue)。

7. 該細胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的培養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能(neng)再(zai)用來培養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用按(an)照說(shuo)明書細胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基來培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。