B95-8EBV 轉(zhuan)化的絨(rong)猴(hou)白細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養(yang)液終

止消化，輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放置(zhi)於凍(dong)存管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保存。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒可直接(jie)放入(ru)-80℃。

壹、商(shang)品介紹(shao)：

二、細胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處(chu)理僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第二天換液並檢(jian)查(zha)細胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代培養。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離子的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使(shi)消化液浸(jin)潤(run)所有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養箱中消化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到新(xin)的含8 mL培養基(ji)的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存管做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公(gong)司正在(zai)出售(shou)的產品：

CTLL-2(小鼠T細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人結(jie)膜(mo)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)HConF 大(da)鼠正五聚蛋白(bai)3(PTX3)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Chicken IgM/RBITC 羅(luo)丹明標(biao)記(ji)雞(ji)IgM 0.3ml

Laminin 1+2： 層(ceng)粘(zhan)連蛋白(bai)1+2抗(kang)體(ti) CM-M119小鼠晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)100mL

FGF2 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 bFGF / FGF2 蛋白(bai) 大鼠正常(chang)T細胞(bao)表(biao)達(da)和(he)分(fen)泌(mi)因子(zi)(RAES/CCL5)ELISA試(shi)劑(ji)盒 dog IgG/RBITC 羅(luo)丹明標(biao)記(ji)狗IgG 0.3ml

LRRC15： 富(fu)含亮酸(suan)重(zhong)復蛋白(bai)15抗(kang)體(ti) NEK3 Others Mouse 小鼠 NEK3 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照)

大(da)鼠子宮(gong)頸上(shang)皮細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji) 100mL 大(da)鼠正常(chang)T細胞(bao)表(biao)達(da)和(he)分(fen)泌(mi)因子(zi)(RAES/CCL5)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Goat IgM/RBITC 羅(luo)丹明標(biao)記(ji)羊IgM 0.3ml

HEXIM1： 雌(ci)激素(su)下(xia)調基(ji)因(yin)1蛋白(bai)抗(kang)體(ti) 人胚肺二倍體(ti)細(xi)胞(bao);KMB-17

F81(貓腎細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 CL-0281HELF(人胚肺成纖(xian)維(wei)細胞(bao))5×106cells/瓶×2 犬腎細胞(bao);MDCK(NBL-2) 人抗(kang)糖脂抗(kang)體(ti)(glycolipid)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 GTP-CH-1 三(san)0酸(suan)鳥(niao)苷環水解(jie)酶(mei)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

HEY2： 轉(zhuan)錄(lu)因子(zi)HEY2蛋白(bai)抗(kang)體(ti) 人羊膜細(xi)胞(bao);WISH

RIN-m5f(大(da)鼠胰島(dao)β細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人抗(kang)糖蛋白(bai)抗(kang)體(ti)(GP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) H5N1流(liu)感(gan)病毒(du)M2型(xing)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

LAGY： 肺(fei)癌相(xiang)關(guan)蛋白(bai)Y抗(kang)體(ti) NA Others H5N1 甲(jia)型(xing)流感(gan) H5N1 (A/Thailand/1(KAN-1)/2004) 神經(jing)酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照)

B95-8EBV 轉(zhuan)化的絨(rong)猴(hou)白細(xi)胞(bao)Proteasome 19S 10B： 蛋白(bai)酶體(ti)PRS10B抗(kang)體(ti) 293細(xi)胞(bao)，轉(zhuan)染(ran)腺(xian)病(bing)毒(du)E1A基(ji)因(yin)的人腎上皮細(xi)胞(bao) 人肺腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao),GLC-82細(xi)胞(bao) 肺(fei)癌組(zu)織源(yuan)性(xing)原(yuan)代細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml)/1ml

SIRP-BETA Others Mouse 小鼠 SIRPB1A / SIRP beta 1 人細胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) 大(da)鼠激肽(tai)原(yuan)1(KNG1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MMP-9/Gelatinase B  大(da)鼠基(ji)質(zhi)金(jin)屬蛋白(bai)酶9/明膠(jiao)酶(mei)B 96T

Proteasome 26S S3： 蛋白(bai)酶體(ti)PSMD3抗(kang)體(ti) CL-0265CAL-27(人舌鱗(lin)癌(ai)細胞(bao))5×106cells/瓶×2

AAV-293人胚腎細胞(bao) Human embryonic kidney cell line AAV-293 DMEM+10%FBS 大(da)鼠激肽(tai)原(yuan)(KNG)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ACA(Human anti-centrol and centrosome antibody)  人抗(kang)中(zhong)性粒/中心(xin)體(ti)抗(kang)體(ti) RK3 Others Human 人 kC / RK3 人細胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照)

人男性正常(chang)細(xi)胞(bao);Hs68 大(da)鼠9(KLK9)ELISA試(shi)劑(ji)盒 T3(Mouse Tri-iodothyronine) 小鼠狀(zhuang)腺(xian)原(yuan)酸(suan) 96T

三(san)、培養註意事項(xiang) 

1. 收到細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象 發生(sheng)請及時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細閱讀細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹致而導(dao)致細胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責任由 客戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶表面，顯(xian)微鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分(fen)細胞(bao)由(you)於溫度 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接(jie)種到新(xin)的培養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件的培養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收到細胞(bao)後前(qian) 3 天各(ge)拍幾張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司技術部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩(wen)定的情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我們(men)的技術(shu)人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培養細胞(bao)，請(qing)換用按(an)照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制的培養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。