原(yuan)代(dai)細胞是指(zhi)從機體(ti)的(de)組織(zhi)(如人組織(zhi)、小鼠(shu)組織(zhi)、大鼠(shu)組織(zhi)和兔組織(zhi)等)經(jing)蛋(dan)白酶(mei)或(huo)其(qi)它的方(fang)法獲(huo)得單(dan)個(ge)細胞並(bing)在(zai)體(ti)外(wai)進行(xing)模(mo)擬(ni)機體(ti)培(pei)養(yang)的(de)細胞,稱(cheng)為原(yuan)代(dai)細胞。
 

　　壹(yi)般(ban)認為(wei),培養的(de)原(yuan)代的第(di)1代細胞和傳代(dai)到第(di)10代以(yi)內(nei)的細胞統(tong)稱(cheng)為原代細胞培(pei)養。在(zai)人工(gong)條(tiao)件(jian)下使其(qi)原代細胞生(sheng)存、生(sheng)長(chang)、繁殖和傳代(dai),進(jin)行(xing)細胞生(sheng)命(ming)過程、細胞癌(ai)變、細胞I程等問題的研究(jiu)。
 

　　那麽(me)關於原代細胞的(de)傳代(dai)培(pei)養(yang),我們應(ying)該(gai)怎(zen)麽(me)做(zuo)呢(ne)?壹(yi)般(ban)有(you)以(yi)下兩種方(fang)法：
 

　　壹(yi)、貼(tie)壁(bi)細胞的(de)消化(hua)法傳代(dai)
 

　　1、吸除或倒(dao)掉瓶(ping)內(nei)舊培(pei)養液(ye)。
 

　　2、加入(ru)1ml左(zuo)右(you)消化液(ye)(yi蛋(dan)白酶(mei)或(huo)與EDTA混合(he)液(ye))輕輕(qing)搖(yao)動(dong)培養瓶(ping),使瓶(ping)底(di)細胞都浸(jin)入溶液(ye)中。
 

　　3、消(xiao)化(hua)2-5分(fen)鐘後把培(pei)養瓶(ping)放(fang)置在顯(xian)微鏡下進行(xing)觀(guan)察,發現原(yuan)貼(tie)壁(bi)的細胞逐(zhu)漸(jian)趨(qu)於圓形,在還未漂(piao)起時(shi),棄去(qu)消化(hua)液(ye),加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終止消化(hua)。
 

　　4、用吸管(guan)將貼(tie)壁(bi)的細胞吹(chui)打成(cheng)懸(xuan)波,分別接(jie)種到另外(wai)兩到三個(ge)培養(yang)瓶(ping)中(zhong),置(zhi)37°C培養(yang)箱中繼(ji)續(xu)培(pei)養。第(di)二天(tian)觀(guan)察貼(tie)壁(bi)生(sheng)長(chang)情況(kuang)。
 

　　二、懸(xuan)浮細胞的(de)傳代(dai)
 

　　1、直(zhi)接(jie)傳代
 

　　①讓懸(xuan)浮細胞慢慢沈澱在(zai)瓶(ping)底後,將上(shang)清(qing)吸掉1/2-2/3.
 

　　②用(yong)吸管(guan)吹(chui)打形(xing)成細胞懸(xuan)液(ye)後,分(fen)別接(jie)種到另外(wai)兩到三個(ge)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)37*C培養(yang)箱中培養(yang)。
 

　　2、離(li)心法傳代(dai)
 

　　①將細胞連(lian)同(tong)培(pei)養(yang)液(ye)壹(yi)並(bing)轉移到離(li)心管(guan)內(nei) ,離(li)心800-1000rpm , 5分(fen)鐘。
 

　　②去除上清(qing),加(jia)新的培(pei)養液(ye)到離(li)心管(guan)內(nei),用吸管(guan)吹(chui)打使(shi)之形(xing)成(cheng)細胞懸(xuan)液(ye)。
 

　　③將細胞懸(xuan)液(ye)分別接(jie)種到另外(wai)兩到三個(ge)培養(yang)瓶(ping)中(zhong),置(zhi)37*C培養(yang)箱中培養(yang)。