BT-474人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使用(yong)、不(bu)得用於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商品(pin)介(jie)紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化，再(zai)輕輕(qing)吹打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然後按 1:2 比例進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入(ru)培(pei)養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化，輕輕(qing)吹打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行長期保存。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體操作步驟(zhou)以隨貨(huo)產(chan)品說(shuo)明書(shu)為主。將含有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件下(xia)離(li)心3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然後將所有細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜（或將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養過夜）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代培養(yang)。

a、棄去培(pei)養上(shang)清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使消化液(ye)浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然後在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作臺，輕敲幾下(xia)培(pei)養瓶後加2-3ml培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕輕(qing)打勻後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待細(xi)胞生(sheng)長狀態良(liang)好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好(hao)標識。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

三(san)、培養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比例、所需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞培(pei)養(yang)條件壹(yi)致，若由(you)於培養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問(wen)題，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消化，懸浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種到(dao)新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培養(yang)箱中進(jin)行培養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條件的培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前 3 天(tian)各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司技術(shu)部溝通(tong) 交流(liu)。由於運輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩(wen)定的情況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系，告(gao)知細(xi)胞 的具體情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪直至問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件新配(pei)制的培(pei)養(yang)基(ji)來培養細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後次傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司正在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

LRP5： 低(di)密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)受體相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)5抗(kang)體 615小鼠樹突(tu)狀(zhuang)細(xi)胞肉(rou)瘤瘤株(zhu);DCS

HL-60人(ren)原髓(sui)細(xi)胞白(bai)血(xue)病細(xi)胞 HL-60 primary human myeloid leukemia cells IMDM(GIBCO)+20%FBS 大(da)鼠(shu)載(zai)脂蛋(dan)白(bai)A5(apo-A5)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) IFN- Gamma (mouse) 小(xiao)鼠(shu)γ幹擾素(su) 96T

phospho-LRP5(Thr1492)： 0酸化低(di)密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)受體相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)5抗(kang)體 LRPAP1 Others Human 人 LRPAP1 / A2MRAP 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

小(xiao)腸(chang)隱(yin)窩(wo)上皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 大(da)鼠(shu)載(zai)脂蛋(dan)白(bai)A5(APOA5)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) CTACK/CCL27(Human cutaneous T cell-attracting chemokine,CTACK)  人(ren)皮(pi)膚(fu)T細(xi)胞虜(lu)獲(huo)趨(qu)化因子(zi) 96T

phospho-LRP1(Ser4523)： 0酸化低(di)密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)受體相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體 小鼠樹突(tu)狀(zhuang)細(xi)胞肉(rou)瘤細(xi)胞;DCS

phospho-HDAC2 (Ser394)： 0酸化組蛋(dan)白(bai)去(qu)乙(yi)酰化酶(mei)2抗(kang)體 兔(tu)主動脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞;SMC 白(bai)血(xue)病細(xi)胞，L1210細(xi)胞 SH2細(xi)胞，小(xiao)鼠(shu)B淋(lin)巴細(xi)胞雜交瘤細(xi)胞

TNFRSF17 Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴(hou) / 恒(heng)河(he)猴(hou) TNFRSF17 / BCMA 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 人(ren)抗(kang)狂犬(quan)病毒(du)抗(kang)體(ai-RV)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Melan-A/MART-1 黑(hei)色(se)素(su)-A(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

phospho-HOMER3 (Thr36)： 0酸化HOMER3蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 人少突膠質(zhi)細(xi)胞

IMR-32細(xi)胞，人(ren)神經(jing)母細(xi)胞瘤細(xi)胞 黃桿菌(jun)屬(shu) 人腦(nao)血(xue)管平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞RNAHBCSMC miRNA5 μg 人(ren)抗(kang)可提(ti)取核抗(kang)原(yuan)抗體(ENA-Ab)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) ARIP2a(Activin receptor 2A) 激(ji)活素(su)受體2A/激活素(su)受體相(xiang)互(hu)作用蛋(dan)白(bai)2a抗(kang)原 0.5mg

HRAS+KRAS： 轉化蛋(dan)白(bai)p21抗(kang)體 HA Others H16N3 甲型流(liu)感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血(xue)凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

BT-474人(ren)乳腺導(dao)管(guan)癌細(xi)胞HeLa 229 人(ren)細(xi)胞 大(da)鼠(shu)基(ji)質(zhi)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶(mei)2/明膠酶(mei)A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) PAI  大(da)鼠(shu)纖(xian)溶(rong)酶(mei)原(yuan)激(ji)活物(wu)抑制因子(zi) 96T

Protamine 2： 2抗(kang)體 B16細(xi)胞，小(xiao)鼠(shu)黑色(se)素(su)瘤細(xi)胞 人(ren)小(xiao)細(xi)胞肺癌細(xi)胞,LTEP-sm細(xi)胞 角(jiao)膜(mo)內皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

TNFRSF4 Others Mouse 小(xiao)鼠 TNFRSF4 / OX40 / CD134 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)基(ji)質(zhi)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶(mei)2/明膠酶(mei)A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Methylase(Mouse Methylase) 小(xiao)鼠(shu)甲基(ji)化酶(mei) 96T

PIWIL4： piwi樣(yang)4蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 CL-0192RBL-2H3(大(da)鼠(shu)嗜堿(jian)性(xing)細(xi)胞白(bai)血(xue)病細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

EA.hy926人(ren)臍(qi)靜(jing)脈(mai)細(xi)胞融合(he)細(xi)胞 EA.hy926 human umbilical vein cell fusion cells DMEM培(pei)養(yang)基(ji)+10%FBS 大(da)鼠(shu)基(ji)質(zhi)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶(mei)2(MMP2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) LMA(Human anti-liver cell membrane antibody)  人(ren)抗(kang)肝細(xi)胞膜(mo)抗體 PLAT Others Human 人 PLAT / tPA 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))