COS-7非(fei)洲(zhou)綠猴腎(shen)細(xi)胞 SV40轉化(hua)

公司產(chan)品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直接放入(ru)-80℃。

二、細胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養凍存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參考，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二天換(huan)液並檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去(qu)培養上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養基的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細胞及細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存管位置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養註意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶是否(fou)完好，培(pei)養液是否(fou)有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細胞(bao)說明(ming)書，了(le)解細(xi)胞(bao)相關信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培養條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培養條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出現(xian)問題(ti)，責任(ren)由 客戶自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由於(yu)溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現象。觀察好(hao)細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種到(dao)新的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培養基用(yong)於(yu)細胞(bao)培養。

6. 建議客戶收(shou)到(dao)細胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細胞狀態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏(min)感細(xi)胞會出現不穩(wen)定的(de)情況，請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細胞(bao) 的(de)具體(ti)情況，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直至(zhi)問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養基 (灌液培養基) 不能(neng)再用來培養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培養基來(lai)培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：

PTN Others Mouse 小(xiao)鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 大(da)鼠胰(yi)島素(su)受體(ti)β(ISR-β)ELISA 試(shi)劑盒 Mouse carcinoembryonic antign,CEA  小(xiao)鼠癌(ai)胚(pei)抗原(yuan) 96T

MUC7： 粘(zhan)蛋(dan)白7抗(kang)體(ti) 人急(ji)性淋巴(ba)母(mu)細胞(bao)性白血(xue)病細(xi)胞;MOLT-4

RBL-2H3大(da)鼠嗜(shi)堿(jian)性細胞(bao)白血(xue)病細(xi)胞 RBL-2H3 rat neuophils alkaline cell leukemia MEM培養基(GIBCO)+15%熱(re)滅(mie)活(huo)FBS 大(da)鼠胰(yi)島素(su)受體(ti)(ISR)ELISA試(shi)劑盒 IFN- Omega (Human Interferon Omega ,IFN- Omega )  人ω幹擾(rao)素(su) 96T

MUC13： 粘(zhan)蛋(dan)白13抗(kang)體(ti) PDGFRB Others Human 人 CD140b / PDGFRB 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對照(zhao))

海馬神(shen)經元(yuan)細(xi)胞Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(1ml) 大(da)鼠胰(yi)島素(su)降(jiang)解(jie)酶(IDE)ELISA試(shi)劑盒 ADV IgG XI 腺(xian)病毒(du) IgG Ⅺ型(間接法(fa)二步法(fa))

HLC3： 肺癌癌(ai)基因(yin)蛋白3抗(kang)體(ti) HA Others H1N2 甲(jia)型流(liu)感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解(jie)液 (陽性對照(zhao))

EB病毒轉化(hua)的(de)人(ren)B淋巴(ba)細胞;KMYB 人(ren)降(jiang)解(jie)加速因(yin)子(DAF)ELISA 試(shi)劑盒 TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha) 人壞死(si)因(yin)子-α(多肽抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

High density lipoprotein： 高密(mi)度(du)脂(zhi)蛋(dan)白抗(kang)體(ti) 轉化(hua)細(xi)胞(bao)

HL-60(人早(zao)幼(you)粒急(ji)性白血(xue)病細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 MEF, 小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)成纖維(wei)細(xi)胞(bao) 人腎(shen)皮質近曲小(xiao)管(guan)上皮細胞;HK-2 人降(jiang)鈣素(su)原(yuan)(PCT)ELISA 試(shi)劑盒 rh-TNF alpha protein GST Tagged 重組人(ren)壞死(si)因(yin)子 100ug

HEF1： 蛋白激(ji)酶底(di)物(wu)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白抗(kang)體(ti) 人表(biao)皮黑(hei)色素(su)細胞-深色(se)素(su)總RNAHEM-d NA

COS-7非洲綠猴腎(shen)細(xi)胞 SV40轉化(hua)FAM3D Protein Mouse 重組小(xiao)鼠 FAM3D / Oit1 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽(qian)) 大(da)鼠過(guo)氧化(hua)物(wu)酶體(ti)生物(wu)合(he)成因(yin)子2(PEX2)ELISA試(shi)劑盒 Urotensin II  大(da)鼠尾(wei)加(jia)壓素(su)2 96T

phospho-P53(Ser376)： 0酸化(hua)抑(yi)制基(ji)因(yin)P53抗體(ti) CSF2 Others Rat 大(da)鼠 GM-CSF / CSF2 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照(zhao))

K562 人慢(man)性骨髓(sui)性白血(xue)病細(xi)胞 大(da)鼠過(guo)敏毒(du)素(su)/補體(ti)片斷(duan)4a(C4a)ELISA試(shi)劑盒 cANCA(human anti-neutrophil cytoplasmic antibody)  人抗中(zhong)性粒細胞(bao)胞漿抗(kang)體(ti) TE 354.T細胞(bao)，人(ren)皮膚基底細(xi)胞(bao)癌 人胚腎(shen)細胞(bao),AAV-293細胞(bao) 原(yuan)代單(dan)核(he)細胞(bao)培養特制添(tian)加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml

NA Others H3N2 甲(jia)型流(liu)感 H3N2 (A/Babol/36/2005) 神(shen)經酶 (Neuraminidase/NA) 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 大(da)鼠過(guo)敏毒(du)素(su)/補體(ti)片斷(duan)4a(C4a)ELISA 試(shi)劑盒 LTB4(Mouse Leukotriene B4)  小(xiao)鼠白三(san)烯B4 96T

PCDHB16： 原(yuan)鈣粘(zhan)蛋(dan)白16抗(kang)體(ti) T-104BII型膠(jiao)原(yuan)酶(含(han)100mL酶解(jie)緩(huan)沖液)10mL