CT26.WT小(xiao)鼠結(jie)腸(chang)癌細胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅供(gong)科研研究使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹：

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消化，再輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止消化，輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放置(zhi)於凍存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍存處理僅供(gong)參考(kao)，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產品說明書(shu)為主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍存管(guan)在 37℃水浴中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含適量(liang)培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液浸潤所有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終止消化。輕輕打(da)勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基的新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待細胞(bao)生(sheng)長狀態良好時，可(ke)進行(xing)細胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細胞及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍存液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每支凍存管(guan)凍存1mL細胞懸(xuan)液，註意凍存管(guan)做(zuo)好標識(shi)。將凍存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存管(guan)位置以便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

三(san)、培(pei)養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收到細胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說明書(shu)，了解細胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞形態、所用培(pei)養(yang)基、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細胞因(yin)子等，確(que)保細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任由 客戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞瓶表面，顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞狀態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞(bao)由於溫度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰亡破碎形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察好細胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸浮細胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到細胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記錄細(xi)胞狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個別(bie)敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況(kuang)，請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體情況(kuang)，以便(bian)我(wo)們(men)的技術(shu)人員(yuan)跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到細胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品(pin)：

大鼠骨(gu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠原(yuan)酶(y)ELISA試(shi)劑盒(he) ADV IgM 腺病(bing)毒 IgM 混(hun)合(he)型(xing)(間接(jie)法(fa)二(er)步(bu)法)

MARVELD1： 候選(xuan)抑(yi)制(zhi)基因(yin)MARVELD1抗體 HCT116, 人結(jie)直(zhi)腸癌細(xi)胞(bao) 垂體瘤,AtT20細(xi)胞 COS-7(非洲(zhou)青(qing)猴(hou)腎(shen)細(xi)胞)

WIF1 Others Mouse 小(xiao)鼠 WIF1 / WIF-1 人細胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) 大(da)鼠原(yuan)激活(huo)肽(tai)(TAP)ELISA試劑盒(he) EB-VCA IgG EB 病毒 IgG(間接(jie)法(fa)二(er)步(bu)法)

MTCP1： 成熟(shu)T淋(lin)巴細(xi)胞增殖蛋白(bai)1抗(kang)體 人肺腺(xian)癌細(xi)胞;Calu-3

293TN人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞--用於慢病(bing)毒包(bao)裝 293TN human embryonic kidney cells -- for leiviral packaging DMEM+10%FBS+500ug/ml G418 大(da)鼠原(yuan)激活(huo)肽(tai)(TAP)ELISA 試劑盒(he) EB-VCA IgM EB 病毒 IgM(間接(jie)法(fa)二(er)步(bu)法)

HPV16 L2： 人瘤病(bing)毒16型(xing)L2抗體 CL-0324BT-20(人癌(ai)細胞(bao))5×106cells/瓶×2

Saos-2細胞，人(ren)成(cheng)骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞 鮮綠(lv)青黴 體細胞(bao);HEL 人堿(jian)性胎(tai)兒蛋(dan)白(BFP)ELISA 試劑盒(he) Tranthyretin 甲(jia)狀腺(xian)素(su)運(yun)載蛋白(bai)(抗原(yuan)) 0.5mg

H7N9 Matrix Protein 1： A型病毒H7N9 M1蛋(dan)白抗體 HA Others H5N1 甲(jia)型流(liu)感(gan) H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞裂解液 (陽性對(dui)照)

EB病毒轉化的人B淋(lin)巴細(xi)胞;KM933 人堿(jian)性0酸(suan)酶(ALP)ELISA 試(shi)劑盒(he) rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor) 長因(yin)子 0.1mg

Hirudin： 水蛭素(su)抗(kang)體 SV40T轉化的人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞;293T

CT26.WT小(xiao)鼠結(jie)腸(chang)癌細胞(bao)TDGF1 Protein Rat 重(zhong)組大(da)鼠 Cripto / TDGF1 蛋白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠果糖(tang)胺(an)(FRA)ELISA試(shi)劑盒(he) PF/PFP(Mouse Perforin/Pore-forming protein)  小(xiao)鼠穿孔素(su) 96T

phospho-PAK1/2/3(Thr423)： 0酸(suan)化p21激活激酶1/2/3抗(kang)體 IL2RB Others Canine 狗 IL2RB / IL2 Receptor beta 人細胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照)

KB 人口(kou)腔(qiang)上(shang)皮癌(ai)細胞(bao) 大(da)鼠果糖(tang)胺(an)(FA)ELISA試(shi)劑盒(he) PI Ab-IgG/IgM(human phosphatidylinositol antibody IgG/IgM)  人0脂(zhi)酰肌醇(chun)抗(kang)體 TE 353.Sk細胞(bao)，人正(zheng)常皮膚(fu)細(xi)胞(bao) 人胚(pei)腎(shen)上(shang)皮包(bao)裝細(xi)胞(bao),GP2-293細(xi)胞(bao) 原(yuan)代(dai)滑膜皮(pi)細胞(bao)培(pei)養(yang)特(te)制(zhi)添加劑Many types of cells包(bao)裝：5/2.5/1ml

OSMR Others Mouse 小(xiao)鼠 OSMR / IL-31RB 人細胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) 大(da)鼠歸巢關(guan)聯細(xi)胞(bao)黏(nian)附分子(HCAM)ELISA試劑盒(he) MMP-3  大鼠基質(zhi)金(jin)屬(shu)蛋白(bai)酶3 96T

phospho-PRKCZ(Thr500)： 0酸(suan)化蛋白激酶C(T500)抗(kang)體 CM-M130小(xiao)鼠肝外(wai)膽管(guan)上(shang)皮細(xi)胞培(pei)養(yang)基100mL