高密(mi)度脂蛋(dan)白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)原(yuan)理(li):

免疫測(ce)定(ding)技(ji)術的(de)基礎(chu)在(zai)於(yu)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)之間(jian)的(de)特異結合(he)反應，所以任何優(you)質(zhi)的(de)診斷(duan)試劑(ji)離(li)不(bu)開(kai)優質的(de)原(yuan)料(liao)，如抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)，酶等(deng)。以前(qian)用於免疫測(ce)定(ding)的(de)抗(kang)原(yuan)通(tong)常(chang)為(wei)各(ge)種純化(hua)抗(kang)原(yuan)，而(er)抗(kang)體(ti)則為(wei)純化(hua)抗(kang)原(yuan)免疫動(dong)物後獲(huo)得(de)的(de)多克(ke)隆抗(kang)體(ti)和使用雜交(jiao)瘤(liu)技(ji)術得(de)到(dao)的(de)單克(ke)隆抗(kang)體(ti)，而(er)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)的(de)標(biao)記(ji)物如酶標(biao)結合(he)物則通(tong)過各(ge)種(zhong)化(hua)學(xue)合(he)成方法制備。近(jin)年(nian)來，隨(sui)著分子(zi)生(sheng)物學(xue)的(de)發展，使用基因工(gong)程(cheng)方法制備各(ge)種特殊的(de)抗(kang)原(yuan)或高密(mi)度脂蛋(dan)白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)抗(kang)體(ti)及(ji)其酶結合(he)物等(deng)免疫測(ce)定(ding)試劑(ji)幾(ji)成為(wei)現實(shi)的(de)新(xin)壹代(dai)試劑(ji)，各(ge)種(zhong)新(xin)型(xing)使用的(de)測(ce)定(ding)方法也(ye)不(bu)斷(duan)出現。

高密(mi)度脂蛋(dan)白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)用途:

高(gao)密(mi)度脂蛋(dan)白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)基礎(chu)是抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)的(de)固相(xiang)化(hua)及(ji)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)的(de)酶標(biao)記(ji)。結合(he)在固相載(zai)體(ti)表面的(de)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)仍保持(chi)其免疫學(xue)活性，酶標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)既保留(liu)其免疫學(xue)活性，又保留(liu)酶的(de)活性。在(zai)測(ce)定(ding)時(shi)，受(shou)檢(jian)標(biao)本(測(ce)定(ding)其中(zhong)的(de)抗(kang)體(ti)或抗(kang)原(yuan))與(yu)固相(xiang)載體(ti)表面的(de)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)起反(fan)應。用洗(xi)滌的(de)方法使固(gu)相(xiang)載體(ti)上(shang)形成的(de)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)復合(he)物與(yu)液(ye)體(ti)中(zhong)的(de)其他(ta)物質分(fen)開。再加入酶標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)，也(ye)通(tong)過反(fan)應而(er)結合(he)在固相載(zai)體(ti)上(shang)。此時(shi)固相(xiang)上(shang)的(de)酶量(liang)與(yu)標(biao)本中(zhong)受(shou)檢(jian)物質的(de)量(liang)呈(cheng)壹(yi)定(ding)的(de)比例。加入酶反應的(de)底物後，底(di)物被(bei)酶催化(hua)成為(wei)有(you)色產物，產物的(de)量(liang)與(yu)標(biao)本中(zhong)受(shou)檢(jian)物質的(de)量(liang)直接(jie)相(xiang)關，故可(ke)根據呈色的(de)深淺(qian)進行(xing)定(ding)性或定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)。由(you)於酶的(de)催化(hua)效(xiao)率很(hen)高(gao)，間(jian)接(jie)地(di)放大了免疫反應的(de)結果(guo)，使測(ce)定(ding)方法達到很(hen)高(gao)的(de)敏感(gan)度(du)。 ELISA可(ke)用於測(ce)定(ding)抗(kang)原(yuan)，也(ye)可(ke)用於測(ce)定(ding)抗(kang)體(ti)。

高密(mi)度脂蛋(dan)白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)操作(zuo)程(cheng)序：

    1. 棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)稀(xi)釋(shi)後(hou)洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩(shuai)去洗(xi)滌液(ye)，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹。如此(ci)重復5次(ci)，拍幹。

    2. 每(mei)孔(kong)先(xian)加入顯色劑(ji)A50μl，再加入顯色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避光(guang)顯色15分鐘。。

    3. 取出酶標(biao)板(ban)，每(mei)孔(kong)加終止液(ye)50μl，終止反應（此時(shi)藍色立(li)轉黃(huang)色）。

    4.測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白孔(kong)調零(ling)，在450nm波(bo)長下(xia)測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的(de)吸光(guang)度值（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應在加終止液(ye)後(hou)15分(fen)鐘以內進行(xing)。

    5.根據高密(mi)度脂蛋(dan)白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)的(de)濃度及(ji)對應的(de)OD值計(ji)算(suan)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線的(de)直線回(hui)歸方程(cheng)，再根據樣(yang)品的(de)OD值在(zai)回(hui)歸方程(cheng)上(shang)計(ji)算(suan)出對應的(de)樣(yang)品濃度。也(ye)可(ke)以(yi)使用各種(zhong)應用軟件(jian)來(lai)計(ji)算(suan)。應記(ji)住由(you)於樣(yang)品稀(xi)釋(shi)了(le)的(de)，其實(shi)際濃度應該乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。