COS-1非(fei)洲綠(lv)猴(hou)SV40轉化的腎(shen)細胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不得(de)用於臨(lin)床(chuang)診斷！

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹：

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終止消化，再輕輕吹打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸，然後按 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養液終

止消化，輕輕吹打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮中進行長期保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可直接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供參考(kao)，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書(shu)為主(zhu)。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基混合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹(chui)勻。然後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含(han)適(shi)量(liang)培養基的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即可進行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶後加(jia)2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻(yun)後裝入無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞(bao)生長狀態良好(hao)時(shi)，可進行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液，裝入無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行細胞(bao)計數。

b、根據細胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置以(yi)便下次拿(na)取。

三、培養註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液是(shi)否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等現象，若(ruo)有(you)上述現象 發(fa)生請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形態、所用培(pei)養基、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等，確保細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹致，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件不壹致而導致細胞(bao)出現問題，責任由(you) 客戶自行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細胞(bao)狀態。因運(yun)輸問題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成碎片，是(shi)正(zheng)常現象。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基重(zhong)懸 細胞(bao)，並接種到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件的培(pei)養基用於細胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態，便於和(he)我(wo)司技(ji)術部(bu)溝通 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸的原(yuan)因，個別敏(min)感細胞(bao)會出現不穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系，告(gao)知細胞(bao) 的具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我們的技(ji)術人(ren)員跟(gen)蹤回訪直(zhi)至問題解決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸用的培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不能(neng)再(zai)用來培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制的培(pei)養基來培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公(gong)司正(zheng)在出售的產品(pin)：

293FT人(ren)胚(pei)腎(shen)細胞(bao)-用(yong)於慢(man)病(bing)毒(du)包裝 Human embryonic kidney cell line 293FT - for leiviral packaging 人(ren)胚(pei)腎(shen)細胞(bao) 大(da)鼠(shu)1(IGF-1)ELISA 試劑盒(he) ADV IgG VII 腺(xian)病(bing)毒(du) IgG Ⅶ型(xing)(間(jian)接法(fa)二步(bu)法(fa))

MCPIP1： 單核(he)細胞(bao)趨(qu)化(hua)誘導蛋(dan)白(bai)1抗體 FGFR3 Others Mouse 小鼠(shu) FGFR3 / CD333 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

滑(hua)膜細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105次方(fang)(1ml) 大鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)樣(yang)蛋白(bai)3(INSL3)ELISA試劑盒(he) ADV IgM VII 腺(xian)病(bing)毒(du) IgM Ⅶ型(xing)(間(jian)接法(fa)二步(bu)法(fa))

Myosin heavy chain 1： 肌球蛋白(bai)重(zhong)鏈(lian)抗體 小鼠(shu)漿細胞(bao)瘤(liu);MPC-11

HS 683(人(ren)腦(nao)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 生孢(bao)梭菌 大鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)受體底物2(IRS2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ADV IgM XI 腺(xian)病(bing)毒(du) IgM Ⅺ型(xing)(間(jian)接法(fa)二步(bu)法(fa))

H1N1+H5N1+H3N2 nucleocapsid protein： A型(xing)流(liu)感病(bing)毒(du)核(he)衣殼(ke)蛋白(bai)抗體 人(ren)支(zhi)氣(qi)管上皮(pi)樣(yang)細胞(bao);BEAS-2B

HK-2(人(ren)腎(shen)小管上皮(pi)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 MN-c, 小鼠(shu)皮(pi)質神經元 人(ren)胚(pei)肺成(cheng)纖(xian)維細胞(bao);WI-38 [WI38] 人(ren)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)II(Collagenase II)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 TGF- Beta R2 peptide 轉移(yi)生長因子(zi)β受體2(多肽(tai)抗原(yuan)) 0.5mg

H1N1+H5N1+H3N2 nucleocapsid protein： A型(xing)流(liu)感病(bing)毒(du)核(he)衣殼(ke)蛋白(bai)抗體 人(ren)淋(lin)巴內皮(pi)細胞(bao)總(zong)RNAHLEC NA

SW-13(人(ren)腎(shen)上腺(xian)皮質(zhi)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)I(Collagenase I)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Thymosin Alpha-1  α-1 (-Thymosin alpha-1) 0.5mg

Haemophilus influenza B： B型(xing)流(liu)感病(bing)毒(du)蛋白(bai)抗體 IL17A Others Human 人(ren) IL17 / IL17A CHO細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

COS-1非(fei)洲綠(lv)猴(hou)SV40轉化的腎(shen)細胞(bao)Jurkat(懸(xuan)浮(fu)) 急性T淋(lin)巴細胞(bao)白(bai)血病(bing) 大(da)鼠過氧化(hua)物酶(mei)體增殖物激活(huo)受體γ(PPARγ)ELISA試劑盒(he) TXB2(Mouse Thromboxane B2)  小鼠(shu)血(xue)栓素(su)B2 96T

plant lectin B4： 植物凝集素(su)IB4 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-3(human) 白(bai)介素(su)3抗體 Hs 578Bst細胞(bao)，人(ren)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao) 表(biao)達(da)SV40T抗原(yuan)人(ren)胚(pei)腎(shen)上皮(pi)細胞(bao),293FT細胞(bao) 胰(yi)腺(xian)星狀細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105次方(fang)(1ml)

IL1R1 Others Mouse 小鼠(shu) IL1R1 / CD121a 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 大鼠過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)體增殖物激活(huo)受體β(PPAR-B/PPARD)ELISA試劑盒(he) MIP-3 Beta/ELC/CCL19  大鼠(shu)巨噬(shi)細胞(bao)炎(yan)性蛋(dan)白(bai)3β 96T

PIG3： p53誘(you)導(dao)蛋白(bai)3抗體 T-108B膠原(yuan)酶(mei)(含(han)100mL酶(mei)解(jie)緩沖液(ye))10mL