DMS79細(xi)胞(bao)

公司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研(yan)究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶傳代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

壹、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培養(yang)凍存處(chu)理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入無菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入無血清細(xi)胞(bao)凍存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記(ji)錄凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

組織(zhi)線(xian)粒(li)體(ti)NADH氧(yang)化(hua)酶活性定(ding)量檢測試劑盒

融(rong)合(he)蛋(dan)白處(chu)理試劑專題(ti)

體液(ye)HCV（HEPATITIS VIRUS C）病毒(du)定量PCR擴增(zeng)檢測試劑盒

石(shi)蠟切片組織(zhi)NF KAPPA B P50蛋(dan)白表達(da)NBT顯色(se)光(guang)學顯微(wei)鏡(jing)檢測試劑盒

轉(zhuan)基(ji)因(yin)玉米GA21品(pin)系基(ji)因(yin)檢測試劑盒

通用冰(bing)凍切片HRP酶聯(lian)檢測封閉溶液

組織(zhi)ZAP70激酶(mei)活性定(ding)量檢測試劑盒（A/B/C）

DNA損(sun)傷(shang)彗星(xing)中性檢測試劑盒（熒(ying)光(guang)染(ran)色(se)）

冰(bing)凍切片膠原纖(xian)維（GIESON）染(ran)色(se)試劑盒

動物扁(bian)桃腺(xian)組織(zhi)細(xi)胞(bao)分離培養(yang)試劑盒

造(zao)血轉(zhuan)錄因(yin)子PU.1單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

甘(gan)受(shou)體α4抗體(ti)

趨化(hua)素(su)樣(yang)因(yin)子超(chao)家(jia)族(zu)成員2抗體(ti)

KB抑制(zhi)蛋(dan)白激酶(mei)β單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)間(jian)粘附(fu)分子-1（CD54）單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

ZDHHC14蛋(dan)白抗體(ti)

跨膜(mo)蛋(dan)白超(chao)家(jia)族(zu)9-1抗體(ti)

DMS79細(xi)胞(bao)APC標(biao)記(ji)小(xiao)鼠(shu)CD80單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

鋅(xin)指蛋(dan)白833抗體(ti)

三(san)、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰亡破(po)碎形(xing)成碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和(he)我司(si)技(ji)術部溝通 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的(de)原因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術人員跟蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。