DoTc2-4510細(xi)胞

公司產(chan)品僅供科(ke)研研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打細(xi)胞使之脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

壹(yi)、商品介紹：

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使之脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進行(xing)長期保存。使用程序(xu)

降溫盒可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養操作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養凍存(cun)處理(li)僅供參(can)考，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說明(ming)書為主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養基混(hun)合均勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然後將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而(er)定），然後在顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打勻後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀態良好(hao)時(shi)，可(ke)進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量(liang)加入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做好標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便下次拿(na)取。

公司正(zheng)在出(chu)售的(de)產(chan)品：

細(xi)胞NADPH氧化(hua)酶活(huo)性化(hua)學發光(guang)法定量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒

GST融合蛋白(bai)擴增試(shi)劑(ji)盒

HCV（HEPATITIS VIRUS C）病(bing)毒標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)定量(liang)PCR擴增檢測試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞NF KAPPA B P50蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)比色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒

轉(zhuan)基(ji)因(yin)玉米T14品系基(ji)因(yin)檢測試(shi)劑(ji)盒

通用石蠟(la)切(qie)片(pian)HRP酶(mei)聯(lian)檢測封(feng)閉(bi)溶(rong)液

細(xi)胞SPHK1激(ji)酶(mei)活(huo)性定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

DNA損(sun)傷彗星(xing)中(zhong)性檢測試(shi)劑(ji)盒（銀染(ran)）

冰(bing)凍切片(pian)脂肪組織染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)盒

植物磷脂酶D1（Phospholipase D1）活(huo)性比色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒

食物(wu)鈣(gai)離(li)子(zi)濃(nong)度(du)熒光(guang)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒

甘受體β/GlyR β抗(kang)體

趨(qu)化(hua)素樣(yang)因(yin)子(zi)超(chao)家(jia)族成員(yuan)2亞(ya)型(xing)1抗(kang)體

KB抑(yi)制(zhi)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)β抗(kang)體

細(xi)胞間(jian)粘附(fu)分(fen)子(zi)1（CD54）抗(kang)體

ZDHHC15蛋(dan)白(bai)抗(kang)體

跨膜(mo)蛋(dan)白(bai)酶(mei)絲(si)1抗(kang)體

DoTc2-4510細(xi)胞APC標(biao)記(ji)小鼠(shu)CD86單克(ke)隆抗體

鋅指蛋(dan)白(bai)835抗(kang)體

三、培(pei)養註意事項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完好，培(pei)養液是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了解細(xi)胞相(xiang)關信息，如細(xi)胞形態、所(suo)用培(pei)養基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞培(pei)養條件(jian)壹(yi)致，若由(you)於培(pei)養條件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀態後，75%酒(jiu)精消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養基用於細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態，便於和我司技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定的(de)情(qing)況，請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體情(qing)況，以便我們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問(wen)題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅供科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。