EpH41424細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培養

液終止消(xiao)化(hua)，再輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變圓(yuan)後加(jia)入培養液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移入-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入液氮中(zhong)進行(xing)長期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供參考，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適量(liang)培養基的培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸潤所有細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後在顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓(yuan)並脫落，迅速拿回操作臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例分(fen)到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培養液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做好(hao)標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產(chan)品：

細(xi)胞(bao)半(ban)-1（CASPASE-1）活性(xing)熒光(guang)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

GST融(rong)合蛋白(bai)陽(yang)性(xing)菌落(luo)鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)

組織科(ke)薩(sa)基病(bing)毒(du)A（Coxsackievirus A）定(ding)量PCR擴(kuo)增(zeng)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

石蠟切(qie)片組(zu)織RHO 蛋白(bai)表(biao)達(da)NBT顯色光(guang)學(xue)顯(xian)微鏡檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

轉基因(yin)油菜（canola）GT73品系(xi)基因檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

PRONASE酶(mei)解(jie)法石(shi)蠟(la)切(qie)片抗(kang)原修(xiu)復(fu)處(chu)理試(shi)劑盒(he)

酶(mei)耦(ou)聯(lian)比色法定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

植(zhi)物培養細(xi)胞(bao)DNA損傷(shang)彗(hui)星(xing)熒(ying)光(guang)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

全組織NADH心肌(ji)黃酶(mei)（NADH-TR）活性(xing)染色(se)試(shi)劑盒(he)

純(chun)化(hua)微粒(li)體(ti)磷脂(zhi)酶(mei)D2（Phospholipase D2）活性(xing)比色法定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

OPA-1蛋白(bai)表(biao)達(da)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)砷(shen)元素比色法定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)CYP1A2蛋白(bai)表(biao)達(da)比色法定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

組織基(ji)質(zhi)金(jin)屬（MMP-9）活性(xing)熒光(guang)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

R-G細(xi)胞(bao)活(huo)力和雕(diao)亡(wang)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

增(zeng)殖(zhi)細(xi)胞(bao)核(he)抗原（核內參）重(zhong)組兔(tu)單克隆抗體(ti)

甘丙(bing)肽受體(ti)3抗體

趨化(hua)因子(zi)受體1重(zhong)組兔(tu)單克隆抗體(ti)

KCTD4蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋白(bai)13重(zhong)組兔(tu)單克隆抗體(ti)

ZMYND17蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

跨膜受(shou)體蛋白(bai)Notch-2抗體

EpH41424細(xi)胞(bao)A-Raf 重(zhong)組兔(tu)單克隆抗體(ti)

鋅指(zhi)蛋白(bai)854抗(kang)體(ti)

三、培養註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培養液是否有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象 發生請(qing)及時和我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用培養基、血清比例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培養條件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養條件不(bu)壹致而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎形(xing)成碎片，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的培養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的(de)培養瓶(ping)或(huo)培養皿中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條件(jian)的(de)培養基用於細(xi)胞(bao)培養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後前 3 天(tian)各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於和我司(si)技術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的原因，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的情(qing)況，請(qing)及時和我們(men)聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培養基 (灌液培養基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培 養條件新(xin)配(pei)制的培養基來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。