EVSA-T細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液終止(zhi)消化，再輕輕吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加入(ru)培養(yang)液終

止(zhi)消化，輕輕吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行長(chang)期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培養(yang)基後吹勻(yun)。然(ran)後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量培養(yang)基的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化液浸潤所有(you)細(xi)胞(bao)，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消化。輕輕打勻後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正在(zai)出售(shou)的產品(pin)：

組(zu)織(zhi)半(ban)-1（CASPASE-1）活(huo)性熒光(guang)定量(liang)檢測試(shi)劑盒(he)

GST融(rong)合(he)蛋白(bai)陽(yang)性表達(da)樹(shu)脂電(dian)泳(yong)篩選試(shi)劑盒(he)

體(ti)液科薩基病毒(du)A（Coxsackievirus A）定量(liang)PCR擴(kuo)增(zeng)檢測試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)RHO 蛋白(bai)表(biao)達(da)比色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑盒(he)

轉(zhuan)基因油(you)菜（canola）HCN92品(pin)系(xi)基因檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

PEPCIN酶(mei)解(jie)法石(shi)蠟切片抗原(yuan)修復處(chu)理(li)試(shi)劑盒(he)

組(zu)織(zhi)磷酸(suan)烯醇式(shi)丙(bing)酮酸(suan)羧化酶(mei)（PEPCase）活(huo)性

植(zhi)物(wu)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)DNA損(sun)傷彗星(xing)熒光(guang)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

冰凍(dong)切(qie)片琥珀酸(suan)脫氫(qing)酶(mei)活(huo)性染色(se)試(shi)劑盒(he)

通(tong)用(yong)性前列(lie)E2（PGE2）高效(xiao)液相色(se)譜法紫(zi)外定量(liang)檢測試(shi)劑盒(he)

MFN-1(MITOFUSIN) 蛋白(bai)表(biao)達(da)檢測試(shi)劑盒(he)

組(zu)織(zhi)砷(shen)元素(su)比(bi)色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)CYP1A2蛋白(bai)表(biao)達(da)熒光(guang)定量(liang)檢測試(shi)劑盒(he)

體(ti)液基質金(jin)屬(shu)（MMP-9）活(huo)性熒光(guang)定量(liang)檢測試(shi)劑盒(he)

BrdU標(biao)記(ji)法細(xi)胞(bao)繁(fan)殖(zhi)流式(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)檢測試(shi)劑盒(he)

增(zeng)殖(zhi)細(xi)胞(bao)核(he)抗原(yuan)（內(nei)參(can)）單(dan)克(ke)隆抗體(ti)

甘(gan)丙(bing)肽(tai)受(shou)體(ti)拮(jie)抗劑抗體(ti)

趨化因(yin)子受(shou)體(ti)D6抗體(ti)

KCTD6蛋白(bai)抗體(ti)

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋白(bai)14t重(zhong)組(zu)兔(tu)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)

ZMYND19蛋白(bai)抗體(ti)

跨(kua)膜受(shou)體(ti)蛋白(bai)Notch-3單(dan)克(ke)隆抗體(ti)

EVSA-T細(xi)胞(bao)A-Raf抗體(ti)

鋅指(zhi)蛋白(bai)855抗體(ti)

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象 發生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培(pei)養(yang)基、血清比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正常現(xian)象。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到(dao)新的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的培養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後前 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通 交流(liu)。由於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的情況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用(yong)的培養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不能(neng)再用(yong)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照說明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配(pei)制的培養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹次(ci)傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。