FaDu細胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化，再輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基重懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱中培養(yang)；

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細胞(bao)凍存：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化，輕輕吹打(da)細胞(bao)使之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液(ye)氮中(zhong)進(jin)行長期(qi)保存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下細胞(bao)培養(yang)凍存處(chu)理(li)僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後吹勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入含(han)適量培養(yang)基的培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視細胞(bao)情況而(er)定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)化情況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基終止消(xiao)化。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基的新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍存。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計數。

b、根據細胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血清細胞(bao)凍存液(ye)，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液(ye)，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存。記錄凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取(qu)。

公司正(zheng)在(zai)出售的產(chan)品(pin)：

細胞(bao)半(ban)-3（CASPASE-3）活性比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

GST融合蛋白THROMBIN酶切(qie)試劑盒

通(tong)用(yong)型(xing)科薩(sa)基(ji)病(bing)毒B（Coxsackievirus B）定(ding)量PCR擴增(zeng)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

細胞(bao)TRAIL 蛋白表達流式(shi)細胞(bao)儀檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

轉基(ji)因油菜(cai)（canola）T45品(pin)系基(ji)因檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

簡易(yi)化學法(fa)石(shi)蠟切(qie)片抗原(yuan)修復(fu)處(chu)理(li)試劑盒

純化溶(rong)酶體(ti)酸性磷酸(suan)酶活性比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

果(guo)蠅DNA損(sun)傷(shang)彗(hui)星(xing)熒光(guang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

全(quan)組織(zhi)氧化酶和(he)琥(hu)珀酸脫(tuo)氫(qing)酶（Combined COX-SDH）雙(shuang)酶活性染色(se)試劑盒

通(tong)用(yong)性(xing)前(qian)列(lie)E2（PGE2）高效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜法(fa)熒光(guang)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

ENDOPHILIN蛋白表達檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

通(tong)用(yong)型(xing)硫(liu)酸(suan)酶（rhodanase）活性比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

載玻片細胞(bao)CYP2B1蛋白表達熒光(guang)顯微(wei)鏡檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

組織(zhi)基(ji)質金屬（MMP-10）活性熒光(guang)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

紅色(se)熒光(guang)細胞(bao)繁(fan)殖與(yu)毒性(xing)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

粘(zhan)蛋白12抗體

甘(gan)露(lu)聚(ju)糖(tang)結合凝集(ji)素(su)絲(si)肽酶2抗體

去(qu)泛素(su)酶10抗體

KDEL受(shou)體(ti)抗體

細胞(bao)角蛋白16單克(ke)隆(long)抗體

ZNT6蛋白抗體

跨(kua)膜絲(si)蛋白酶3抗體

FaDu細胞(bao)ARM重復(fu)X連(lian)鎖(suo)蛋白ARMCX3抗體

鋅(xin)指蛋白880抗體

三、培(pei)養(yang)註意事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首先觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好，培養(yang)液(ye)是否(fou)有(you)漏液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若有(you)上述現(xian)象 發生請及(ji)時和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞(bao)說明(ming)書，了解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細胞(bao)形態、所用培養(yang)基、血清比(bi)例、所需(xu) 細胞(bao)因子等(deng)，確(que)保(bao)細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不壹致而(er)導(dao)致細胞(bao)出現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細胞(bao)瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部(bu)分細胞(bao)由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇烈碰(peng)亡破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精消(xiao)毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可(ke)以消(xiao)化，懸浮細胞(bao)直接混勻(yun)收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基重懸 細胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的培養(yang)基用於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細胞(bao)照片，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因，個別敏感細胞(bao)會出現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情況，請及(ji)時和(he)我們聯(lian)系(xi)，告知細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況，以便(bian)我們的(de)技術(shu)人員跟蹤(zong)回訪(fang)直至問題解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培養(yang)基) 不能再(zai)用來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換用按(an)照說明(ming)書細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新配制的培(pei)養(yang)基來培養(yang)細胞(bao)。     收到(dao)細胞(bao)後第壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。