FAK+/+細(xi)胞(bao)

公司產品(pin)僅供科研研究使(shi)用、不得(de)用於臨床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

壹、商品(pin)介紹：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其移入-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進行長期保(bao)存。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅供參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以隨貨產品(pin)說明書(shu)為主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含(han)適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養過夜）。第二(er)天(tian)換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓(yuan)並脫落，迅(xun)速(su)拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培養液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置於培養箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意凍(dong)存管做(zuo)好標識。將凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存管位(wei)置以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

組織半(ban)-3（CASPASE-3）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

THROMBIN清(qing)除處(chu)理(li)試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)科(ke)薩(sa)基(ji)病毒B（Coxsackievirus B）定(ding)量(liang)PCR擴(kuo)增檢測(ce)試劑(ji)盒

載玻(bo)片(pian)細(xi)胞(bao)TRAIL 蛋白表(biao)達熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑(ji)盒

油(you)菜樣(yang)品(pin)處(chu)理(li)試劑(ji)盒

鹽酸化(hua)學法(fa)石(shi)蠟切(qie)片(pian)抗(kang)原修復處(chu)理(li)試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)溶酶(mei)體(ti)型酸性磷酸(suan)酶(mei)活性(xing)熒光(guang)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)DNA損傷彗星(xing)熒光(guang)檢測(ce)試劑(ji)盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)NADH心(xin)肌(ji)黃酶(mei)和(he)琥(hu)珀(po)酸脫氫酶(mei)（Combined NADH-TR-SDH）雙(shuang)酶(mei)活性(xing)染色(se)試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)前(qian)列E2（PGE2）高(gao)效液相色(se)譜法(fa)熒光(guang)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

BAD蛋白表(biao)達檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)硫(liu)酸(suan)酶(mei)（rhodanase）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)組織CYP2B1蛋白表(biao)達熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑(ji)盒

體(ti)液基質(zhi)金屬(shu)（MMP-10）活(huo)性(xing)熒光(guang)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

磺(huang)酰羅丹(dan)明B（Sulforhodamine B）細(xi)胞(bao)繁(fan)殖(zhi)與毒(du)性(xing)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

粘(zhan)蛋白13抗(kang)體(ti)

甘露糖(tang)苷(gan)酶(mei)2抗(kang)體(ti)

去(qu)泛素酶(mei)16抗(kang)體(ti)

KDM3A蛋白抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋白16抗(kang)體(ti)

ZPLD1蛋白抗(kang)體(ti)

跨膜(mo)絲(si)蛋白酶(mei)5抗(kang)體(ti)

FAK+/+細(xi)胞(bao)ARSA單(dan)克(ke)隆(long)抗體(ti)

鋅指蛋白898抗(kang)體(ti)

三(san)、培養註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完好，培養液是否有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若由於培養條(tiao)件(jian)不壹致而(er)導致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責任(ren)由 客(ke)戶自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由於溫度 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置於培養箱中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於和(he)我(wo)司技術(shu)部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運輸(shu)的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪直至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科研使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液培養基) 不能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按(an)照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。