P19小(xiao)鼠畸胎(tai)瘤細(xi)胞

公(gong)司(si)產品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用於(yu)臨床診斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中培養；

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培養液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中進行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用程序

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養凍存(cun)處(chu)理(li)僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產品說明(ming)書為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基的(de)培養瓶中培養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去培養上清(qing)，用不含(han)鈣、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱中消化1-2 min（視細(xi)胞情況而(er)定），然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情況，若(ruo)細胞大部分變圓並脫落(luo)，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置於(yu)培養箱中培養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態良好(hao)時，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞及細(xi)胞培(pei)養液(ye)，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細胞計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位置以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

NDUFA8： NADH脫氫酶(mei)α家族(zu)8抗體 豬(zhu)腎細(xi)胞;PK-15

白(bai)細胞介(jie)素(su)-17超家族(zu) 大鼠熱休克蛋(dan)白(bai)β2(HSPβ2)ELISA試劑盒(he) Pro-ANP(Mouse Pro Atrial Natriuretic Peptide)  小(xiao)鼠前心(xin)肽 96T

NDUFV1： NADH脫氫酶(mei)黃(huang)素(su)蛋(dan)白(bai)1抗體 CFR Others Rat 大鼠 CFR / CFR-alpha 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

小鼠胎(tai)兒真(zhen)皮成纖維(wei)細(xi)胞培(pei)養基 100mL 大鼠熱休克蛋(dan)白(bai)90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)ELISA試劑盒(he) 8-iso-PG  大鼠8異前(qian)列(lie)腺(xian)素(su) 96T

NDUFV2： NADH脫氫酶(mei)黃(huang)素(su)蛋(dan)白(bai)2抗體 R 1610細(xi)胞，中國(guo)倉(cang)鼠體細(xi)胞 人胰腺(xian)癌(ai)細胞,PC-3細(xi)胞 CM-R101大鼠腦動(dong)脈(mai)血(xue)管平(ping)滑肌細(xi)胞培(pei)養基100mL

人冠狀(zhuang)動脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞培(pei)養基 100mL 人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA 試劑盒(he) CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer) CD147(抗原) 0.5mg

phospho-IKK beta(S474)： 0酸化(hua)KB抑制(zhi)蛋(dan)白(bai)激酶(mei)β抗體 人間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞-脂(zhi)肪 人骨髓橫(heng)紋(wen)肌(ji)肉(rou)癌(ai)細(xi)胞，SJCRH30[RC13;RMS 13;SJRH30]細(xi)胞 MFC(胃(wei)癌細(xi)胞)

FCER1A Others Human 人 FcERI / FCER1A 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 人8異前(qian)列(lie)腺(xian)素(su)(8-iso-PG)ELISA 試劑盒(he) CD169/sialoadhesin(Sn)(Sialic acid-binding Ig-like lectin 1;Siglec-1) CD169抗原 0.5mg

phospho-IKK beta(Ser476)： 0酸化(hua)KB抑制(zhi)蛋(dan)白(bai)激酶(mei)β抗體 中國(guo)倉(cang)鼠卵(luan)巢(chao)細胞;CTLA4 Ig-24

3T3NIH細胞，小(xiao)鼠成纖維(wei)細(xi)胞 HUVEC(人臍(qi)靜脈(mai)血(xue)管內(nei)皮細胞) 小(xiao)鼠垂體(ti)瘤(liu)細(xi)胞;GT1-1 人8-異構前列(lie)腺(xian)素(su)F2α(8-epi-PGF2α)ELISA 試劑盒(he) CD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator) B 和 T 淋巴細(xi)胞衰(shuai)減蛋(dan)白(bai)(抗原) 0.5mg

P19小鼠畸胎(tai)瘤細(xi)胞RING1： 環指蛋(dan)白(bai)1抗體 散鱗(lin)鏡鯉尾(wei)鰭(qi)細(xi)胞;YZ21

EB病毒(du)轉(zhuan)化的(de)人B淋巴細(xi)胞;KM933 人髂動(dong)脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞培(pei)養基 100mL 大鼠白(bai)介(jie)素(su)12(IL-12/P40)ELISA試劑盒(he) iNOS(Human inducible nitric oxide synthase)  人誘(you)導(dao)型合成酶(mei) 96T

MST1R： 原癌基因c-Met相關(guan)酪酸(suan)激酶(mei)抗體 CL-0392NCI-H2087(人非(fei)小(xiao)細(xi)胞肺(fei)腺癌(ai)細胞)5×106cells/瓶×2

COS-7L, 非(fei)洲(zhou)綠(lv)猴腎成纖維(wei)細(xi)胞 大鼠白(bai)介(jie)素(su)12(IL-12/P40)ELISA 試劑盒(he) PL-A2(Human Phospholipidase A2)  人0脂酶(mei)A2 96T

phospho-Ron(Ser1349)： 0酸化(hua)原癌基因c-Met相關(guan)酪酸(suan)激酶(mei)抗體 SEZ6L2 Others Human 人 SEZ6L2 / PSK-1 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

三(san)、培養註意事(shi)項 

1. 收到細胞後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否完好(hao)，培養液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解細胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所用培養基、血(xue)清比(bi)例、所需 細(xi)胞因子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培養條(tiao)件(jian)不壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客戶(hu)自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因運輸(shu)問(wen)題，部分細胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰亡(wang)破碎(sui)形成碎片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可(ke)以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的(de)培(pei)養基重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培養皿(min)中，置於(yu)培養箱中進行培養。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培養基用於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到細胞後(hou)前 3 天(tian)各拍幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便於(yu)和我(wo)司(si)技術部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因，個別敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定的情況，請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情況，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術人員(yuan)跟蹤回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培養基 (灌(guan)液(ye)培養基) 不(bu)能再(zai)用來培養細胞，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養基來培養細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。