更新(xin)時(shi)間(jian):2025-11-23
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動(dong)物血清(qing):內(nei)皮細胞血清(qing)、GIBCO胎牛清(qing)、HyClone。動(dong)物血清(qing):內(nei)皮細胞血清(qing)、GIBCO胎牛清(qing)、HyClone。
細(xi)胞:*細胞、正常細胞、腫(zhong)瘤細(xi)胞、腫(zhong)瘤耐(nai)藥細胞。細胞:*細胞、正常細胞、腫(zhong)瘤細(xi)胞、腫(zhong)瘤耐(nai)藥細胞。
小鼠β澱粉樣蛋(dan)白1-42elisa試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
1.試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏環(huan)境中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡 15-30 分鐘後方可使用(yong),酶標包被板開封(feng)後如未用(yong)完,板條應(ying)裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存。
2.濃洗(xi)滌液(ye)可(ke)能(neng)會有結(jie)晶(jing)析(xi)出,稀釋時(shi)可在(zai)水浴(yu)中(zhong)加溫助(zhu)溶(rong),洗滌時(shi)不影(ying)響結果(guo)。
3.各(ge)步加樣均(jun)應(ying)使用(yong)加樣器,並經常校對(dui)其準(zhun)確性,以(yi)避免(mian)試(shi)驗誤差。壹(yi)次加樣時(shi)間(jian)控(kong)制(zhi)在(zai) 5 分鐘內,如標本數(shu)量多,使用(yong)排(pai)槍加樣。
4.請(qing)每(mei)次測(ce)定的同(tong)時(shi)做標準曲(qu)線,做復(fu)孔。如標本中(zhong)待(dai)測(ce)物質(zhi)含量過(guo)高(樣本OD 值大(da)於(yu)標準品孔*孔(kong)的OD 值),請(qing)先(xian)用樣品稀釋液(ye)稀釋壹(yi)定倍(bei)數(shu)(n 倍)後再(zai)測(ce)定,計(ji)算時(shi)請(qing)後乘(cheng)以(yi)總稀釋倍數(shu)(×n×5)。
5.封(feng)板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次性(xing)使用(yong),以(yi)避免(mian)交叉(cha)汙染。
6.底物請(qing)避(bi)光保存。
7.嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)的操(cao)作進行(xing),試(shi)驗結果(guo)判定(ding)必須以(yi)酶標儀(yi)讀(du)數(shu)為準.
8.所(suo)有(you)樣品,洗滌(di)液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都應(ying)按傳(chuan)染(ran)物處理(li)。
操(cao)作步驟
1.標準品的稀釋:本試(shi)劑(ji)盒提供原(yuan)倍標準品壹(yi)支,用(yong)戶可按照下(xia)列圖表(biao)在(zai)小試(shi)管(guan)中(zhong)進行(xing)稀釋。
2.加樣:分別設(she)空白孔(空白對(dui)照孔(kong)不加樣品及(ji)酶標試(shi)劑(ji),其余(yu)各(ge)步操(cao)作相(xiang)同(tong))、標準孔(kong)、待測(ce)樣品孔。在(zai)酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測(ce)樣品孔中(zhong)先(xian)加樣品稀釋液(ye) 40µl,然(ran)後再(zai)加待測(ce)樣品 10µl(樣品終(zhong)稀釋度為 5 倍(bei))。加樣將(jiang)樣品加於酶標板孔底部,盡量不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁(bi),輕輕晃動(dong)混(hun)勻。
3.溫育:用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液(ye):將(jiang) 30 倍濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用(yong)蒸餾水(shui) 30 倍(bei)稀釋後備用
5.洗滌:小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜(mo),棄去(qu)液(ye)體(ti),甩(shuai)幹(gan),每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液(ye),靜置(zhi) 30 秒後棄去(qu),如此(ci)重復(fu) 5 次,拍(pai)幹(gan)。
6.加酶:每(mei)孔加入酶標試(shi)劑(ji) 50µl,空白孔除(chu)外(wai)。
7.溫(wen)育:操(cao)作同(tong) 3。
8.洗(xi)滌(di):操(cao)作同(tong) 5。
9.顯色:每(mei)孔先(xian)加入顯色劑(ji) A50µl,再(zai)加入顯色劑(ji) B50µl,輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終(zhong)止(zhi):每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液(ye) 50µl,終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)(此(ci)時(shi)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃(huang)色)。
11.測(ce)定:以(yi)空白空調(tiao)零(ling),450nm 波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量各(ge)孔(kong)的吸光度(OD 值(zhi))。 測(ce)定應(ying)在(zai)加終(zhong)止(zhi)液(ye)後 15 分鐘以(yi)內進行(xing)。
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