chang liver人宮頸(jing)癌(ai)細胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消(xiao)化，再輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變圓後(hou)加(jia)入培養(yang)液終(zhong)

止消(xiao)化，輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒(he)可直接放(fang)入-80℃。

二、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨貨產(chan)品說明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸液的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸液加(jia)入含適量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況而(er)定），然後在(zai)顯微鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消化情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基(ji)的新皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良好時，可進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集細胞(bao)及細胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用(yong)PBS清洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計數。

b、根據細胞(bao)數量加(jia)入無血(xue)清細胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述(shu)現象 發生請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞(bao)說明(ming)書，了(le)解細胞(bao)相關信息，如細胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清比例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任由 客(ke)戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞(bao)由於溫(wen)度 變化及劇(ju)烈(lie)碰亡破碎形(xing)成碎片(pian)，是正常現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以(yi)消化，懸浮(fu)細胞(bao)直接混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用(yong)相同(tong)條(tiao)件的培養(yang)基(ji)用(yong)於細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到細胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交流。由(you)於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別敏感(gan)細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定的情況，請及時和我(wo)們聯(lian)系，告知細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的技術人員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的培養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第壹次傳代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：

MAPK8IP1： 原(yuan)活化蛋(dan)白激酶8相互(hu)作用(yong)蛋(dan)白1抗體(ti) CD86 Others Mouse 小(xiao)鼠 CD86 / B7-2 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

骨(gu)骼(ge)肌細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次方(fang)(1ml) 大鼠(ypsin)ELISA試劑(ji)盒(he) MP IgG 肺炎支(zhi)原(yuan)體(ti) IgG(間接法(fa)二步(bu)法(fa))

MYL6： 肌球蛋(dan)白輕鏈(lian)6抗體(ti) 轉(zhuan)PYTL基(ji)因(yin)小(xiao)鼠支持(chi)細胞(bao);15P-1

HuT 78(人T淋(lin)巴細胞(bao)白血(xue)病細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 阪崎(qi)腸桿菌(jun) 大(da)鼠(ypsin)ELISA 試劑(ji)盒(he) MP IgM 肺炎支(zhi)原(yuan)體(ti) IgM(間接法(fa)二步(bu)法(fa))

phospho-MEF2C(Ser59)： 0酸(suan)化肌細胞(bao)增(zeng)強(qiang)因(yin)子2C抗體(ti) CM-H094人滑膜(mo)細胞(bao)培養(yang)基(ji)100mL

HL-7702(人肝(gan)正常細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 RLF, 大鼠淋(lin)巴成(cheng)纖維(wei)細胞(bao) 人類成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)系;CNLMG-B5538SKIN 人堿(jian)性(xing)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)生長因(yin)子9(bFGF-9)ELISA 試劑盒(he) TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A) 神(shen)經(jing)生長因(yin)子的壹種(抗原(yuan)) 0.5mg

HuC： 副(fu)綜合癥小(xiao)腦變性相(xiang)關蛋(dan)白抗體(ti) 人海(hai)馬(ma)趾星形(xing)膠(jiao)質細胞(bao)總RNAHA-h NA

TE-10(人食(shi)管(guan)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人堿(jian)性(xing)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)生長因(yin)子6(bFGF-6)ELISA 試劑盒(he) TrK A.B.C 神(shen)經(jing)生長因(yin)子的壹種(抗原(yuan)) 0.5mg

Hsp93： 植物(wu)熱休克蛋(dan)白93抗體(ti) CD63 Others Rat 大鼠 CD63 / Tspan-30 / Teaspanin-30 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

人臍血(xue)間質(zhi)幹細胞(bao) Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells 人堿(jian)性(xing)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)生長因(yin)子4(bFGF-4)ELISA 試劑盒(he) active Caspase 3(caspase-3 p12 subunit) 活(huo)化半胱胺(an)酸(suan)蛋(dan)白酶蛋(dan)白-3抗原(yuan) 0.5mg

chang liver人宮頸癌(ai)細胞(bao)MDA-MB-415人腺癌細胞(bao) MDA-MB-415 human breast adenocarcinoma cells L-15培養(yang)基(ji)+15%FBS 大(da)鼠胱抑(yi)素(su)SN(CST1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) MMP-7  大(da)鼠基(ji)質(zhi)金屬(shu)蛋(dan)白酶7 96T

phospho-P53(Ser392)： 0酸(suan)化抑制(zhi)基(ji)因(yin)P53抗體(ti) REN Others Human 人 RENIN 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

中(zhong)國倉(cang)鼠卵巢(chao)細胞(bao)(亞系克隆(long));CHO-HCV-NS4A 大鼠胱抑(yi)素(su)SA(CST2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Synuclein mouse  小(xiao)鼠突(tu)觸(chu)素(su) 96T

phospho-PAK1 (Ser)： 0酸(suan)化p21激活激酶1抗體(ti) 山羊(yang)皮膚成纖維(wei)樣(yang)細胞(bao);DG-S1

小(xiao)鼠少(shao)突(tu)膠(jiao)質(zhi)前(qian)體(ti)細胞(bao)(MOPC)(5×105) Hep-2, 人喉癌(ai)細胞(bao)系 Human 大鼠胱抑(yi)素(su)S(CST4)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Beta2-GP1 IgA/G/M(Human Beta2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M)  人(ren)β2糖(tang)蛋(dan)白1抗體(ti) 間充(chong)質幹(gan)細胞(bao)培養(yang)基(ji)MSCM-sf-prf