COLO320DMF細胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)研研(yan)究使用、不得用於臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化，再輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培養(yang)基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

壹(yi)、商品介紹：

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化，輕輕吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並放(fang)置於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行長(chang)期保存(cun)。使用程序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說明書(shu)為主。將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液並檢(jian)查細胞密度。

2) 細胞傳代：如(ru)果(guo)細胞密度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清，用不含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化液浸(jin)潤所(suo)有(you)細胞，將培養(yang)瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視細胞情況(kuang)而定(ding)），然後(hou)在顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞消化情況，若(ruo)細胞大部分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待細胞生長狀態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細胞凍存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血清細胞凍存(cun)液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好標識。將凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

公司(si)正(zheng)在出售的(de)產品：

體液過氧(yang)化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活(huo)性(xing)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑盒(he)

同(tong)位(wei)素（PCR產(chan)物(wu)）蛋白結合甲基(ji)化幹(gan)擾(rao)足(zu)跡(ji)法(fa)分析試劑盒(he)

體液HHV6（HUMAN HERPESVIRUS 6）病(bing)毒

載(zai)玻片細胞TNF BETA蛋白表達(da)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡檢(jian)測試劑盒(he)

通(tong)用型亞(ya)鹽比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑盒(he)

活(huo)體細胞半-8（CASPASE-8）活(huo)性(xing)原(yuan)位熒光染(ran)色檢(jian)測試劑盒(he)

組織PYK2激(ji)酶(mei)活(huo)性(xing)定(ding)量檢(jian)測試劑盒(he)（A/B/C）

細胞有絲(si)分裂熒(ying)光定(ding)量檢(jian)測試劑盒(he)

石(shi)蠟(la)切(qie)片蘇(su)木素(su)伊紅染色試劑盒(he)

組織中鏈酮(tong)脂(zhi)酰硫解酶(mei)（KETOACYL COA THIOLASE）活(huo)性(xing)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑盒(he)

冰(bing)凍切(qie)片羅(luo)丹寧(ning)（RHODANINE）銅(tong)染(ran)色試劑盒(he)

賈(jia)第(di)鞭毛(mao)蟲（Giardia）塗片免(mian)疫熒(ying)光染(ran)色試劑盒(he)

石(shi)蠟(la)切(qie)片組織RyR受(shou)體蛋白表達(da)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡檢(jian)測試劑盒(he)

無(wu)脊椎動物和(he)昆蟲細胞基質金屬（MMP）總(zong)活(huo)性(xing)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑盒(he)

動物脂(zhi)肪組織細胞分離培養(yang)試劑盒(he)

早(zao)老素(su)蛋白-2抗(kang)體

鈣(gai)粘(zhan)蛋白28抗(kang)體

驅動蛋白家族成(cheng)員20B抗(kang)體

JMJD4蛋白抗體

細胞骨架(jia)結合蛋白2抗(kang)體

ZC3H12C蛋白抗體

跨膜(mo)蛋白76/TMEM76抗(kang)體

COLO320DMF細胞APC標記(ji)小(xiao)鼠(shu)CD107a單(dan)克(ke)隆(long)抗體

鋅(xin)指蛋白782抗體

三(san)、培養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首先(xian)觀(guan)察細胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好，培養(yang)液是否(fou)有漏液、渾濁(zhuo)等現象，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象 發生請及(ji)時和(he)我們聯(lian)系。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞說明書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形態、所(suo)用培養(yang)基、血清比(bi)例、所(suo)需(xu) 細胞因(yin)子等，確保(bao)細胞培養(yang)條件壹致，若(ruo)由(you)於培養(yang)條件不壹致而導(dao)致細胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表面，顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞狀態。因(yin)運輸問題(ti)，部分細胞由(you)於溫度 變化及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡破(po)碎形成碎片，是正常現象。觀(guan)察好細胞狀態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並接(jie)種到新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用相同(tong)條件的(de)培養(yang)基用於細胞培養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細胞後(hou)前 3 天各(ge)拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記(ji)錄細胞狀態，便(bian)於和(he)我司(si)技(ji)術部(bu)溝通 交流。由(you)於運輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏感(gan)細胞會出現不穩(wen)定(ding)的(de)情況，請及(ji)時和(he)我們聯(lian)系，告(gao)知細胞 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的(de)技(ji)術人(ren)員跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不能(neng)再用來培養(yang)細胞，請換(huan)用按照(zhao)說明書(shu)細胞培 養(yang)條件新(xin)配制(zhi)的(de)培養(yang)基來培養(yang)細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第(di)壹次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。