CT26+LUC小鼠結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞熒(ying)光素(su)酶(mei)標(biao)記

公(gong)司產品僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入液氮中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直接放入-80℃。

二、細(xi)胞培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以隨貨產品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合均勻。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細胞懸(xuan)液加入含適量(liang)培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化液浸潤所有(you)細胞，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞大部(bu)分變圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後(hou)裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液，補加1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例分到(dao)新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待細胞生長狀態良好(hao)時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液，裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液，用PBS清洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清細胞凍(dong)存液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支(zhi)凍存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否完好(hao)，培養(yang)液是否有(you)漏液、渾濁等現象(xiang)，若有(you)上述現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形態、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血(xue)清比例、所需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞出(chu)現問題(ti)，責(ze)任由(you) 客戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸問題(ti)，部(bu)分細胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是正常現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接混勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接種到(dao)新的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿中，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同條(tiao)件的(de)培養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議客戶收到(dao)細胞後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司技術部(bu)溝通 交流。由(you)於(yu)運輸的(de)原因，個別(bie)敏感細胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的(de)情(qing)況，請及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具體(ti)情況，以便我們的(de)技術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至(zhi)問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註：運輸用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培養(yang)細(xi)胞，請換用按(an)照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：

MDC1： DNA損(sun)傷(shang)關(guan)卡(ka)蛋白(bai)1抗體 FLT4 Others Human 人(ren) VEGFR3 / FLT4 人細(xi)胞裂解液 (陽性對照)

CM-R124大鼠脈絡(luo)膜血(xue)管(guan)細(xi)胞培養(yang)基(ji)100mL 大鼠神經(jing)膠(jiao)質(zhi)纖維(wei)酸性蛋白(bai)(GFAP)ELISA 試劑盒(he) PEDF  大鼠色素(su)上(shang)皮(pi)衍(yan)生因子(zi) 96T

Nebulin： 伴(ban)肌動蛋白(bai)抗體 正(zheng)常大鼠腎(shen)細胞;NRK-52E

U14-GFP(小鼠子(zi)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 SW 1088[SW-1088; SW1088](人(ren)腦星型(xing)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞) 大鼠神經(jing)降(jiang)壓(ya)肽(tai)()ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) TSGF(Mouse Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor)  小鼠特異(yi)生長因子(zi)/相(xiang)關(guan)因子(zi) 96T

NDRG4： 抑(yi)癌(ai)基(ji)因(yin)NDRG4抗體 VERO細胞衍(yan)生株;SVP

ICOS ligand： 誘導(dao)協(xie)同刺(ci)激(ji)分子(zi)配體(ti)CD275抗(kang)體 PRMT6 Others Human 人(ren) PRMT6 / HRMT1L6 人細胞裂解液 (陽性對照)

人(ren)心(xin)肌細胞-RNAHCM-a miRNA5 μg 人(ren)c-myc癌(ai)基(ji)因(yin)產物(c-myc)ELISA 試劑(ji)盒(he) Tubulin- Gamma 微管(guan)蛋白(bai)-γ抗原 0.5mg

IBDV： 雞(ji)傳染(ran)性法氏(shi)囊病病毒抗(kang)體(ti) 人纖(xian)維(wei)肉瘤(liu)細胞;HT-1080

SVEC4-10(小鼠淋(lin)巴結內(nei)皮(pi)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解液 (陽性對照) 人(ren)Clara細(xi)胞分(fen)泌蛋白(bai)(CC-SP)ELISA試劑盒(he) TWIST protein peptide TWIST蛋白(bai)抗原 0.5mg

IL-17： 白(bai)介素(su)-17抗(kang)體(ti) 腦膜細胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

CT26+LUC小鼠結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞熒(ying)光素(su)酶(mei)標(biao)記RNF23： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)23抗體 PTGFRN Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴 EWI-F / PTGFRN 人(ren)細胞裂解液 (陽性對照)

C6/36 白(bai)紋伊(yi)蚊(wen)細胞 大鼠白(bai)介素(su)2(IL-2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ACO-2(Human aconitase 2)  人(ren)烏頭(tou)酸酶(mei)2 96T

RNF24： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)24抗體 2BS細(xi)胞，胚肺細(xi)胞 人(ren)前(qian)列腺(xian)癌(ai)細(xi)胞,VLcop細(xi)胞 人(ren)腎(shen)小管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞;HKC

PRSS27 Others Human 人(ren) PRSS27 / Pancreasin / Marapsin 人(ren)細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠白(bai)介素(su)2(IL2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) 26S PSM(Human 26S proteasome)  人(ren)26S蛋白(bai)酶體 96T

RNF25： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)25抗體 人(ren)小細胞肺(fei)癌(ai)細(xi)胞;NCI-H209