COLO320DM細胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科研(yan)研(yan)究使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化，再(zai)輕輕吹打細胞使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

壹、商品(pin)介紹(shao)：

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止消化，輕輕吹打細胞使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放置於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使用(yong)程序(xu)

降溫(wen)盒可直接放入-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞：以下細胞培養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以隨貨產(chan)品說明(ming)書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存管在 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適量培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜（或將(jiang)細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜）。第二(er)天(tian)換液(ye)並檢查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如果細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使消化液(ye)浸(jin)潤所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞消化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分變(bian)圓並脫落，迅速拿(na)回操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化。輕輕打勻(yun)後(hou)裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集細胞及細胞培養(yang)液，裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血清細胞凍(dong)存液(ye)，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以便下(xia)次拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品：

血(xue)液(ye)過氧化氫(qing)（HYDROGEN PEROXIDE）活(huo)性比(bi)色(se)法定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒

同(tong)位(wei)素(su)（酶(mei)切(qie)產(chan)物）蛋白結合DNA酶(mei)足(zu)跡(ji)法分析(xi)試(shi)劑(ji)盒

組(zu)織HHV6（HUMAN HERPESVIRUS 6）病(bing)毒(du)

細胞TNF BETA蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)流式細胞儀(yi)檢測試(shi)劑(ji)盒

通(tong)用(yong)型(xing)鹽含量熒光定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)半(ban)-7（CASPASE-7）活(huo)性原位(wei)熒(ying)光染色檢測試(shi)劑(ji)盒

細胞PYK2激(ji)酶(mei)活性定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

細胞有(you)絲(si)分裂(lie)比(bi)色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑(ji)盒

通(tong)用(yong)型(xing)蘇木(mu)素(su)伊(yi)紅染色試(shi)劑(ji)盒

組(zu)織短(duan)鏈酮脂酰硫(liu)解酶（KETOACYL COA THIOLASE）活(huo)性比(bi)色(se)法定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒

石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)紅（RUBEANIC ACID）銅染色試(shi)劑(ji)盒

賈第鞭毛蟲（Giardia）塗(tu)片(pian)惠特利(li)三(san)色(se)（Wheatley's trichrome）試(shi)劑(ji)盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)組(zu)織RyR受(shou)體(ti)蛋白(bai)表(biao)達(da)熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測試(shi)劑(ji)盒

無脊椎(zhui)動物和昆(kun)蟲體(ti)液(ye)基質(zhi)金(jin)屬（MMP）總(zong)活(huo)性熒(ying)光定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒

動物新(xin)生心(xin)肌(ji)細胞分離(li)培養(yang)試(shi)劑(ji)盒

早(zao)老素(su)蛋(dan)白(bai)-1抗體(ti)

鈣粘蛋白(bai)23抗體(ti)

驅動蛋白家(jia)族成(cheng)員(yuan)1C抗體(ti)

JmjC結(jie)構(gou)域組(zu)蛋白(bai)去甲基化酶(mei)H3-K36抗體(ti)

細胞骨(gu)架肌(ji)動蛋白樣(yang)蛋白3抗體(ti)

ZC3H11A蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

跨膜蛋(dan)白74抗體(ti)

COLO320DM細胞APC標記(ji)人TNF-α單克(ke)隆(long)抗體(ti)

鋅指(zhi)蛋白781抗體(ti)

三、培養(yang)註意事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察細胞瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了解(jie)細胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需 細胞因子(zi)等，確(que)保細胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現問(wen)題，責任由(you) 客(ke)戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分細胞由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精消毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種到新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的培養(yang)基用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍幾(ji)張細胞照片(pian)，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態，便於和(he)我司技術部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯系，告知細胞 的(de)具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的技術人員跟蹤(zong)回訪直至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞僅(jin)供科研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培養(yang)細胞，請(qing)換用(yong)按(an)照說明(ming)書細胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第壹次傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。