5637人(ren)膀胱癌(ai)細胞說明書

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研(yan)究使用(yong)、不得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

參(can)考資(zi)料(來(lai)源(yuan)文(wen)獻)：

二、細(xi)胞培養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以下(xia)細(xi)胞培養凍(dong)存(cun)處理僅供(gong)參(can)考，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨貨(huo)產(chan)品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸液的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去上(shang)清液，加1-2 mL培養基(ji)後吹勻。然後(hou)將所有細(xi)胞懸液加入(ru)含(han)適量(liang)培養基(ji)的培養瓶中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞懸液加入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜）。第(di)二天(tian)換液(ye)並檢查細胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培養。

    a、棄(qi)去培養上(shang)清，用(yong)不含(han)鈣、鎂離(li)子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消化液浸潤所有細(xi)胞，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而(er)定），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大部分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作臺，輕敲幾下(xia)培養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消化。輕輕打(da)勻後裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上(shang)清液，補加1-2 mL培養液(ye)後吹勻。        

     c、將細(xi)胞懸液按1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培養基(ji)的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態良好時，可進(jin)行細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞及細胞培養液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄去上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

     b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無血清細胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸液，註意凍(dong)存(cun)管(guan)做好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿取(qu)。  

三、培養註(zhu)意事(shi)項(xiang)

1. 收到(dao)細(xi)胞後首(shou)先觀察細胞瓶是(shi)否完(wan)好，培養液(ye)是否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱(yue)讀細(xi)胞說明書，了(le)解(jie)細(xi)胞相關信(xin)息(xi)，如細胞形態、所用(yong)培養基(ji)、血清比例、所需 細(xi)胞因子等，確保細(xi)胞培養條(tiao)件(jian)壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培養條(tiao)件(jian)不壹致而(er)導致細胞出現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態。因運輸問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由(you)於(yu)溫度 變化及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破碎形成碎片，是正常(chang)現象(xiang)。觀察好細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消毒瓶壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以消化，懸浮細(xi)胞直接(jie)混勻收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮的培養基(ji)重懸 細胞，並接(jie)種到新(xin)的培養瓶或(huo)培養皿中，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的培養基(ji)用(yong)於(yu)細胞培養。

6. 建議客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞後前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細胞照片，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態，便於(yu)和我(wo)司(si)技術(shu)部溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞會出現不穩定的情(qing)況，請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具體(ti)情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至問(wen)題(ti)解決。

7. 該細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用(yong)的培養基(ji) (灌液(ye)培養基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培養細(xi)胞，請換用(yong)按照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培 養條(tiao)件(jian)新配(pei)制的培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後次傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

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