ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)方(fang)法(fa)被(bei)廣(guang)泛應用於(yu)各種(zhong)抗原(yuan)和(he)抗體測定(ding),具有靈敏度高,操(cao)作簡(jian)單等優(you)點,但是在具體實(shi)驗過程中影(ying)響(xiang)因素較(jiao)多(duo),並且(qie)要(yao)按照嚴(yan)格(ge)的說(shuo)明(ming)要(yao)求(qiu),在檢驗中除(chu)正常(chang)反(fan)應外(wai),有時常可見到壹(yi)些錯誤(wu)結(jie)果(guo)(即假陽(yang)性(xing)或假(jia)陰(yin)性(xing)結(jie)果(guo)) 影響ELISA測定(ding)錯誤(wu)結(jie)果(guo)的原(yuan)因(yin)主要(yao)包(bao)括(kuo)3類(lei):標本(ben)因素、試(shi)劑(ji)因素以(yi)及操(cao)作因(yin)素。
其(qi)中標(biao)本(ben)因素對(dui)ELISA測定(ding)的(de)影響(xiang)做如下總(zong)結(jie)。

壹、類(lei)風濕因(yin)子(zi)
人血清(qing)中IgM、IgG型(xing)類(lei)風濕因(yin)子(zi)(RF)可以(yi)與ELISA系統(tong)中的(de)捕(bu)獲(huo)抗(kang)體及(ji)酶標記(ji)二(er)抗(kang)的(de)FC段(duan)直(zhi)接結合(he),從而(er)導致假(jia)陽性(xing)。
解(jie)決辦法
1.用(yong)F(ab)2替代完(wan)整的IgG;
2.標(biao)本(ben)用聯有熱變(bian)性(xing)(63℃,10 min)IgG的(de)固(gu)相吸(xi)附劑(ji)處理(將熱變(bian)性(xing)IgG加(jia)入(ru)到(dao)標(biao)本(ben)稀釋液中同(tong)樣有效(xiao));
3.檢測抗(kang)原(yuan)時(shi),可以(yi)用2-巰(qiu)基乙醇等加(jia)入(ru)到(dao)標(biao)本(ben)稀釋液中,使(shi)RF降解(jie)。
二(er)、補(bu)體(ti)
ELISA系統(tong)中固(gu)相壹抗(kang)和標(biao)記(ji)二(er)抗(kang)過程中,抗(kang)體(ti)分子(zi)發(fa)生變(bian)構(gou),其FC段(duan)的(de)補體C1q分子(zi)結合(he)位點被暴(bao)露(lu)出來,使C1q 可(ke)以(yi)將二(er)者(zhe)連接(jie)起來,從而(er)造成(cheng)假陽(yang)性(xing)。
解(jie)決辦法
1.用(yong)EDTA稀(xi)釋標本(ben);
2.用53℃,10 min或56℃,30 min加(jia)熱血清(qing)使(shi)C1q滅(mie)活(huo)。
三(san)、嗜(shi)靶(ba)抗(kang)原(yuan)的(de)自(zi)身抗體(ti)
抗(kang)甲狀(zhuang)腺球蛋(dan)白、抗胰島素等(deng)嗜靶(ba)抗(kang)原(yuan)的(de)自(zi)身抗體(ti),有時能與靶(ba)抗(kang)原(yuan)結(jie)合(he)形成(cheng)復合(he)物,在ELISA方(fang)法(fa)中均(jun)可(ke)幹(gan)擾(rao)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體測定(ding)結(jie)果(guo)。
解決辦法
測定(ding)前(qian)需用(yong)理化(hua)方(fang)法(fa)將其(qi)解離(li)後(hou)再(zai)測定(ding)。
四(si)、嗜異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)
人類(lei)血清(qing)中含(han)有能與嚙(nie)齒類(lei)動物(如(ru)鼠(shu)等(deng))Ig(s) 結(jie)合(he)的天(tian)然嗜(shi)異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti),可將ELISA系統(tong)中壹(yi)抗(kang)和二(er)抗(kang)連(lian)接(jie)起來,也能(neng)造(zao)成(cheng)假陽(yang)性(xing)。
解(jie)決辦法
可(ke)在標本(ben)稀釋液中加(jia)入(ru)過量(liang)的(de)動物Ig(s),但加(jia)入(ru)量(liang)不(bu)足(zu)或亞(ya)類(lei)不同(tong)時(shi)無效(xiao)。