1、壹抗(kang)選擇要點
(1)、確定抗(kang)體(ti)的名(ming)字(zi),註(zhu)意中英文名(ming)字(zi)、它(ta)名(ming)、亞型等信息(xi)。
(2)、確定妳的實驗(yan)類(lei)型,Elisa,WB,IHC,ICC,還是(shi)FACS。壹般抗(kang)體(ti)的說(shuo)明書(shu)都(dou)會(hui)列出(chu)該(gai)抗(kang)體(ti)經(jing)驗(yan)證(zheng)過(guo)適(shi)用於(yu)何種(zhong)實(shi)驗(yan)的類型,如果(guo)抗(kang)體(ti)說(shuo)明 書(shu)沒有提及的應用類(lei)型,並不(bu)意味著該(gai)抗(kang)體(ti)不(bu)適用於(yu)此(ci)種(zhong)分(fen)析(xi)應用類(lei)型,而僅(jin)是說(shuo)明尚未(wei)經(jing)過(guo)此(ci)種(zhong)實(shi)驗(yan)驗(yan)證(zheng),請(qing)根(gen)據(ju)說(shuo)明書(shu)列(lie)出的已驗(yan)證(zheng)的類型來選擇適合(he)妳(ni)實驗(yan)的 抗(kang)體(ti)。
(3)、確定實驗(yan)樣(yang)本(ben)的種(zhong)屬(shu),Human,Mouse,還是(shi)Rat。壹般抗(kang)體(ti)說(shuo)明書(shu)都(dou)列(lie)出該(gai)抗(kang)體(ti)經(jing)試(shi)驗(yan)驗(yan)證(zheng)過(guo)適(shi)用於(yu)何種(zhong)物(wu)種(zhong)實(shi)驗(yan),請(qing)根(gen)據(ju)說(shuo)明書(shu)列(lie)出已驗(yan)證(zheng)的種(zhong)屬(shu)來選擇適合(he)妳(ni)實驗(yan)的抗(kang)體(ti)。
(4)、樣本蛋白的結構性(xing)質(zhi)。了(le)解樣本蛋白的結構性(xing)質(zhi)有助於(yu)選擇最合(he)適(shi)的抗(kang)體(ti),待(dai)測樣本蛋白的結構域(yu)和樣(yang)本(ben)在(zai)提取(qu)和(he)處(chu)理過程(cheng)中是否會(hui)變性(xing),蛋白空(kong)間(jian)構象(xiang)的改變,會(hui)影(ying)響(xiang)抗(kang)體(ti)的免疫親(qin)和反應。
(5)、單多克隆抗(kang)體(ti)的選擇。市面(mian)上(shang)的抗(kang)體(ti)還是(shi)以(yi)多克隆抗(kang)體(ti)為(wei)主(zhu),壹般(ban)單(dan)克隆抗(kang)體(ti)特(te)異(yi)性強(qiang),但親(qin)和力相(xiang)對(dui)小(xiao),檢測(ce)抗(kang)原(yuan)靈敏度(du)相對就(jiu)低(di);而(er)多(duo)克隆抗(kang)體(ti)特(te)異(yi)性稍(shao)弱(ruo),但抗(kang)體(ti)的親(qin)和力強(qiang),靈敏度(du)高(gao),但(dan)易(yi)出現(xian)非特異(yi)性染(ran)色(可以(yi)通過封(feng)閉(bi)等避(bi)免)。
2. 二抗(kang)選擇要點
(1)、種(zhong)屬(shu)來源(yuan)。主(zhu)要根據(ju)壹(yi)抗(kang)種(zhong)屬(shu)來源(yuan)來決定(ding)購買(mai)二抗(kang)來源(yuan),如壹抗(kang)是(shi)小(xiao)鼠來源(yuan),那(na)二抗(kang)就(jiu)買抗(kang)小(xiao)鼠的即可(ke)(羊、兔等均可)。
(2)、標記(ji)物(wu)的選擇。有HRP、Biotin、熒光素(su)等標記(ji)物(wu)。壹般(ban)SP三步法二抗(kang)選擇Biotin標記(ji)的二抗(kang),以(yi)與(yu)後面(mian)的SP結合(he)反(fan)應,而(er)免(mian)疫熒光染(ran)色就(jiu)需要購買(mai)不(bu)同(tong)熒光素(su)標記(ji)的二抗(kang),如(ru)羅(luo)丹明(ming)、FITC、Cy3等常用熒光素(su)。