PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)原理(li)是由(you)壹(yi)對(dui)引(yin)物(wu)介(jie)導(dao)，能在動植(zhi)物(wu)體外對(dui)特(te)定(ding)基(ji)因(yin)（DNA）片斷進行快速酶(mei)促擴(kuo)增，經過(guo)n個熱(re)循(xun)環擴(kuo)增，擴(kuo)增產(chan)物中(zhong)所含(han)特(te)定(ding)基(ji)因(yin)數是原(yuan)始(shi)模(mo)板(ban)數的（1+E）n（0＜E＜1,擴(kuo)增效率＝倍，使得檢(jian)測擴(kuo)增產(chan)物中(zhong)的特(te)定(ding)基(ji)因(yin)成為(wei)可能。

　　PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)的使用方法：

　　壹(yi)、稀(xi)釋(shi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(ge)10倍稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例）。由(you)於標(biao)準(zhun)品濃(nong)度非常高(gao)，因(yin)此(ci)下列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要(yao)在獨(du)立的(de)區(qu)域(yu)進行，千(qian)萬(wan)不能汙染樣品(pin)或本試(shi)劑盒(he)的其他(ta)成(cheng)分）。

　　1、標記(ji)6個(ge)離(li)心(xin)管，分(fen)別為(wei)7，6，5，4，3，2。

　　2、用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分別(bie)加(jia)入(ru)45μL熒光(guang)PCR模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)，*用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。

　　3、在7號(hao)管中(zhong)加入(ru)5μL陽性對(dui)照(zhao)（濃(nong)度為(wei)1×10E8拷貝/μL，試(shi)劑盒(he)提供(gong))，充分震蕩(dang)1分鐘(zhong)，得1×10E7拷(kao)貝/μL的標準(zhun)曲(qu)線樣品。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。

　　4、換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在6號(hao)管中(zhong)加入(ru)5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對(dui)照(zhao)(上(shang)步稀(xi)釋(shi)所得(de))，充(chong)分震蕩(dang)1分鐘(zhong)，得1×10E6拷(kao)貝/μL的標準(zhun)曲(qu)線樣品。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。

　　5、換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在5號(hao)管中(zhong)加入(ru)5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對(dui)照(zhao)(上(shang)步稀(xi)釋(shi)所得(de))，充(chong)分震蕩(dang)1分鐘(zhong)，得1×10E5拷(kao)貝/μL的標準(zhun)曲(qu)線樣品。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。

　　6、重(zhong)復上(shang)面(mian)的(de)操作直(zhi)到得(de)到(dao)6個稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)標(biao)準(zhun)曲(qu)線樣品。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。

　　二(er)、樣(yang)品DNA的(de)制備

　　7、用自(zi)選(xuan)方法純(chun)化樣品(pin)的(de)DNA，本產(chan)品跟(gen)市場上絕(jue)大(da)多(duo)數核酸(suan)純(chun)化產(chan)品兼容(rong)。

　　8、如果有N個(ge)樣品(pin)，則需(xu)要(yao)進行N+2個(ge)樣品(pin)提取，多(duo)出的(de)壹個(ge)用作(zuo)樣(yang)品制備陽性對(dui)照(zhao)管、另壹(yi)個(ge)用作(zuo)樣(yang)品制備陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)管。

　　三(san)、設(she)置(zhi)qPCR反應（20μL體系，在樣品制備室(shi)進行）

　　9、如果做(zuo)定(ding)量(liang)分析(xi)並(bing)且(qie)只做(zuo)1次重(zhong)復，則(ze)標(biao)記(ji)N+9個PCR管，其中(zhong)N+2個用於上(shang)步得(de)到的(de)N+2個樣(yang)品，1個用於PCR陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)（用水(shui)做(zuo)模(mo)板(ban)），6個用於標(biao)準(zhun)曲線。如果做(zuo)定(ding)性(xing)分(fen)析(xi)，並(bing)且(qie)只做(zuo)1次重(zhong)復，則(ze)標(biao)記(ji)N+4個PCR管，其中(zhong)N+2個用於上(shang)步得(de)到的(de)N+2個樣(yang)品，1個用於PCR陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)（用水(shui)做(zuo)模(mo)板(ban)），1個用於PCR陽性對(dui)照(zhao)。