人軟(ruan)骨細胞(bao)C28/I2

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供科(ke)研(yan)研究(jiu)使用、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

壹、細胞(bao)培養操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處(chu)理僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅速搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養基(ji)的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進行傳代培養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所有細胞(bao)，將(jiang)培養瓶置於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操作臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)按1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀態良(liang)好(hao)時，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收集細胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支凍存管凍存1mL細胞(bao)懸液(ye)，註意凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍存管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記錄(lu)凍(dong)存管位置以(yi)便下(xia)次(ci)拿取(qu)。

二、培養註意事(shi)項(xiang)

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完好(hao)，培養液(ye)是(shi)否有漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象，若有上述現象 發(fa)生請及時(shi)和我們聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞(bao)說明書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相關信息，如細(xi)胞(bao)形態、所用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件(jian)壹致，若由(you)於(yu)培養條(tiao)件(jian)不壹致而導致細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客戶自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶表面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於溫(wen)度(du) 變化及劇(ju)烈碰亡破碎形(xing)成碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接混(hun)勻收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養瓶或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養。

5. 請客戶用相同條件(jian)的培(pei)養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培養。

6. 建議客戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於(yu)和我司技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出現(xian)不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請及時(shi)和我們聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我們(men)的技(ji)術(shu)人員跟蹤(zong)回訪直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的(de)培養基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養基(ji)) 不能(neng)再用(yong)來(lai)培養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培 養條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培(pei)養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。

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