組(zu)織(zhi) / 細(xi)胞(bao)基(ji)因組(zu) DNA 快速提(ti)取試(shi)劑盒(he)

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)研研究使用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

商(shang)品(pin)屬(shu)性(xing)

保存(cun)條件：本試(shi)劑盒(he)在(zai)室(shi)溫(wen)儲存(cun) 12 個月(yue)不影(ying)響(xiang)使用(yong)效果(guo)。
產(chan)品介(jie)紹(shao)：
結合(he)液/蛋(dan)白酶 K 迅速(su)裂(lie)解(jie)細(xi)胞(bao)和滅活細(xi)胞(bao)內(nei)核(he)酸酶，然(ran)後基(ji)因組(zu) DNA 在(zai) 高離(li)序鹽(yan)狀(zhuang)態下選(xuan)擇性(xing)吸附於(yu)離(li)心柱(zhu)內(nei)矽基質(zhi)膜(mo)，再(zai)通過(guo)壹系(xi)列快速的(de)漂(piao)洗－離(li)心的(de) 步驟，抑(yi)制物(wu)去除(chu)液(ye)和漂(piao)洗液(ye)將細(xi)胞(bao)代(dai)謝(xie)物(wu)、蛋白等雜質去除(chu)，最(zui)後低(di)鹽(yan)的(de)洗(xi)脫緩(huan)沖(chong) 液將(jiang)純凈基因組(zu) DNA 從矽基質(zhi)膜(mo)上(shang)洗(xi)脫。
產(chan)品特(te)點：
1.重復性(xing)好(hao):離(li)心吸附柱(zhu)內(nei)矽基質(zhi)膜(mo)全(quan)部(bu)采用(yong)進(jin)口(kou)特制吸附膜(mo)，柱(zhu)與柱(zhu)之間(jian)吸附量(liang)差異(yi)極小(xiao)。克(ke)服(fu)了國產(chan)試(shi)劑盒(he)膜(mo)質(zhi)量(liang)不穩(wen)定(ding)的(de)弊(bi)端。
2.多(duo)次柱漂(piao)洗確(que)保高純度(du)，OD260/OD280 典(dian)型的(de)比(bi)值(zhi)達 1.7～1.9，長(chang)度(du)可達 30kb -50kb，可直接用(yong)於 PCR，Southern-blot 和各(ge)種酶切反應(ying)。
註意(yi)事項：
1.結合(he)液 CB 或(huo)者抑(yi)制物(wu)去除(chu)液(ye) IR 低溫(wen)時(shi)可能出現析出和沈澱，可以(yi)在(zai) 37℃水(shui)浴幾分(fen) 鐘(zhong)幫助(zhu)重新(xin)溶解(jie)，恢(hui)復(fu)澄(cheng)清(qing)透明後冷卻到(dao)室溫(wen)即可使用(yong)。

2.避(bi)免(mian)試(shi)劑長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)空(kong)氣(qi)中(zhong)產(chan)生揮發、氧化(hua)、pH 值變化。
3.結合(he)液 CB 和抑(yi)制物(wu)去除(chu)液(ye) IR 中(zhong)含(han)有刺激(ji)性(xing)化合(he)物，操作時(shi)要(yao)戴乳(ru)膠(jiao)手(shou)套(tao)，避(bi)免(mian)沾染皮膚(fu)，眼(yan)睛(jing)和衣(yi)服(fu)。若(ruo)沾染皮膚(fu)、眼(yan)睛(jing)時(shi)，要(yao)用(yong)大量(liang)清(qing)水(shui)或者生(sheng)理鹽(yan)水沖(chong)洗。

4.洗(xi)脫液(ye) EB 不含(han)有螯合(he)劑 EDTA，不影(ying)響(xiang)下(xia)遊酶切(qie)、連(lian)接等反應(ying)。也(ye)可以(yi)使用(yong)水洗脫， 但(dan)應該確(que)保批 pH 大於(yu) 7.5，pH 過(guo)低影(ying)響洗(xi)脫效率(lv)。用(yong)水洗脫 DNA 應(ying)該保存(cun)在(zai)-20℃。 DNA 如(ru)果(guo)需(xu)要長(chang)期保存(cun)，可以(yi)用(yong) TE 緩(huan)沖(chong)液洗(xi)脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但(dan)是 EDTA 可能影(ying)響下遊酶切(qie)反應(ying)，使用(yong)時(shi)可以(yi)適當(dang)稀(xi)釋。
自(zi)備(bei)試(shi)劑：無水(shui)乙醇、1xPBS 緩(huan)沖(chong)液、RNase A（10mg/ml）（RNase A(10 mg/ml) 有售）。
操作步驟：
提(ti)示(shi)：第(di)壹次(ci)使用(yong)前(qian)請(qing)先在(zai)漂(piao)洗液(ye) WB 中(zhong)加(jia)入定(ding)量(liang)無水(shui)乙醇，充分(fen)混勻，加(jia)入後(hou)請及時(shi)在(zai)方(fang)框(kuang)打(da)鉤(gou)標(biao)記(ji)已加(jia)入乙醇，以(yi)免多(duo)次加(jia)入!
如(ru)果需(xu)要去除(chu) RNA，可在(zai)加(jia)蛋白(bai)酶 K 溶液前(qian)先加(jia)入 4μl RNaseA（10mg/ml）溶(rong)液振蕩(dang) 15sec，室(shi)溫放置 5 min

1.組(zu)織(zhi)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)
a. 收(shou)集(ji)約 105-10
6懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)到(dao)壹個 1.5ml 離(li)心管(guan)；對(dui)於貼(tie)壁細(xi)胞(bao)，應(ying)該先用(yong)胰(yi)蛋白(bai)消(xiao)化(hua)後(hou)吹打下(xia)來(lai)收(shou)集(ji)。
b. 12,000rpm 離心 10 sec，使細(xi)胞(bao)沈澱下來。棄上(shang)清(qing)，留(liu)下細(xi)胞(bao)團(tuan)和大(da)約(yue) 10-20μl殘留的(de)液(ye)體(ti)。
c. 加(jia) 200μl 1×PBS 重懸(xuan)洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)，12,000rpm 離(li)心 10 sec，使細(xi)胞(bao)沈澱下來。棄上(shang)清(qing), 將(jiang)細(xi)胞(bao)沈澱重懸(xuan)於(yu) 180μl 1XPBS 中(zhong)。
d. 加(jia)入 20μl 蛋(dan)白酶 K (20mg/ml)溶液，充分(fen)混勻（可選步驟：為(wei)清(qing)除(chu) RNA，加(jia)入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩(dang)混勻，可選擇室溫放置 5min），再加(jia)入 200μl結(jie)合(he)液 CB，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻，在(zai) 70℃放置 10 min。
e. 冷卻後(hou)入 200μl 無水(shui)乙醇，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻，此(ci)時(shi)可能會(hui)出現絮狀(zhuang)沈澱。
f. 將上(shang)壹步混合(he)物（包(bao)括可能有的(de)沈澱）加(jia)入吸附柱(zhu) AC 中(zhong)，（吸附柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管中(zhong)）12,000rpm 離(li)心 1 min，倒(dao)掉收(shou)集(ji)管中(zhong)的(de)廢液(ye)。
g. 按操作步驟 4 繼(ji)續後(hou)續的(de)實(shi)驗(yan)。
2.動(dong)植(zhi)物(wu)組(zu)織(zhi)（例如(ru)鼠(shu)肝腦(nao)或(huo)者植(zhi)物(wu)葉片）
a. 新(xin)鮮或者解(jie)凍(dong)的(de)組(zu)織(zhi)在(zai)液(ye)氮(dan)中(zhong)研磨成細(xi)粉(fen)後或者用(yong)解(jie)剖(pou)切(qie)成小(xiao)碎塊(kuai)（切(qie)成(cheng)微(wei)塊(kuai)可以(yi)提(ti)高產(chan)量(liang)）後取 20-50mg，轉(zhuan)入(ru)裝有 180μl 組(zu)織(zhi)裂(lie)解(jie)液(ye) TL 的(de) 1.5ml 離(li)心管(guan)中(zhong)， 用(yong)大口徑槍(qiang)頭(tou)吹打(da)混勻。
b. 加(jia)入 20μl 的(de)蛋(dan)白(bai)酶(mei) K 溶(rong)液(20mg/ml)，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻。
c. 將裂(lie)解(jie)物(wu)放置在(zai) 55℃水(shui)浴 1-3 小(xiao)時(shi)或(huo)者直(zhi)到組(zu)織(zhi)消(xiao)化(hua)全(quan)，期(qi)間輕柔的(de)振蕩(dang)幾(ji)次幫(bang)助(zhu)裂(lie)解(jie)。為(wei)清(qing)除(chu) RNA，加(jia)入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩(dang)混勻（可選擇室溫放置 5 min）。
d. 加(jia)入 200μl 結(jie)合(he)液 CB，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻，70℃放置 10 min。
e. 冷卻後(hou)加(jia)入 200μl 無水(shui)乙醇，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻，此(ci)時(shi)可能會(hui)出現絮狀(zhuang)沈澱。
f. 用(yong) 1ml 的(de)槍(qiang)頭(tou)吸取混合(he)物，將(jiang)混合(he)物加(jia)入壹個吸附柱(zhu) AC 中(zhong)，（吸附柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管中(zhong)）12,000rpm 離(li)心 1 min，倒(dao)掉收(shou)集(ji)管中(zhong)的(de)廢液(ye)。
g. 按操作步驟 4 繼(ji)續後(hou)續的(de)實(shi)驗(yan)。
3.動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)（鼠(shu)尾）
a.將 0.2-0.5cm 的(de)鼠(shu)尾巴尖(jian)(即 20-50mg)剪(jian)碎(sui)（壹定(ding)要(yao)剪 0-2cm 範(fan)圍(wei)內(nei)的(de)尾巴尖(jian)，否(fou)則裂(lie)解(jie)效果(guo)不好(hao)），或(huo)者在(zai)液(ye)氮(dan)中(zhong)研磨組(zu)織(zhi)成(cheng)細(xi)粉(fen)後，轉(zhuan)入(ru)裝有 180μl 組(zu)織(zhi)裂(lie)解(jie)液(ye) TL 的(de) 1.5ml 離(li)心管(guan)中(zhong)， 用(yong)大口徑槍(qiang)頭(tou)吹打(da)混勻。
b.加(jia)入 20μl 的(de)蛋(dan)白(bai)酶(mei) K(20mg/ml)，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻。
c.將裂(lie)解(jie)物(wu)放置在(zai) 55℃水(shui)浴 3 小(xiao)時(shi)或(huo)者直(zhi)到組(zu)織(zhi)消(xiao)化(hua)全(quan)，期(qi)間輕柔的(de)振蕩(dang)幾(ji)次幫(bang)助(zhu)裂(lie)解(jie)。為(wei)清(qing)除(chu) RNA，加(jia)入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩(dang)混勻（可選擇室溫放置 5 min）。
d.用(yong)壹個 1ml 不帶針(zhen)頭(tou)的(de)壹次(ci)性(xing)輸液(ye)抽打裂(lie)解(jie)物(wu) 2-3 次(ci)。
e.加(jia)入 200μl 結(jie)合(he)液 CB 和 200μl 無水(shui)乙醇，立刻(ke)渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang)充分(fen)混勻。
f.12,000rpm 離心 5 min，將(jiang)上(shang)清(qing)加(jia)入壹個吸附柱(zhu) AC 中(zhong)，（吸附柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管中(zhong)）12,000rpm 離(li)心 30-60 sec，倒(dao)掉收(shou)集(ji)管中(zhong)的(de)廢液(ye)。
g.按操作步驟 4 繼(ji)續後(hou)續的(de)實(shi)驗(yan)。
4.加(jia)入 500μl 抑(yi)制物(wu)去除(chu)液(ye) IR，12,000rpm 離心 30 sec，棄廢液(ye)。
5.加(jia)入 500μl 漂(piao)洗液(ye) WB（請先檢查是否(fou)已加(jia)入無水(shui)乙醇!），12,000rpm 離(li)心 30 sec，棄掉廢液(ye)。
6.重復操作步驟 5。
7.將(jiang)吸附柱(zhu) AC 放回(hui)空(kong)收(shou)集(ji)管中(zhong)，12,000rpm 離(li)心 2 min，將(jiang)吸附柱(zhu)置(zhi)於室溫(wen)放置數分鐘(zhong)，以(yi)晾幹吸附材(cai)料中(zhong)殘余的(de)漂(piao)洗液(ye), 以(yi)免漂(piao)洗液(ye)中(zhong)殘留乙醇抑(yi)制下(xia)遊反應(ying)。
8. 取出吸附柱(zhu) AC，放入壹個幹凈的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)吸附膜(mo)的(de)中(zhong)間(jian)部(bu)位(wei)加(jia) 50-100 洗脫緩(huan)沖(chong)液 EB（洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液事先在(zai) 65℃水(shui)浴中(zhong)預(yu)熱(re)效果(guo)更好(hao)），室(shi)溫(wen)放置 3-5 min，12,000rpm 離心 1 min。為(wei)了增加(jia)基因(yin)組(zu) DNA的(de)得(de)率(lv)，將(jiang)得(de)到的(de)溶(rong)液(ye)重新(xin)加(jia)入離(li)心吸附柱(zhu)中(zhong)，室(shi)溫(wen)放置 2 min，12,000rpm 離心 1 min。(註意(yi): DNA 產(chan)物應(ying)保存(cun)在(zai)-20℃，以(yi)防 DNA降解(jie)。)

公(gong)司(si)正在(zai)出售的(de)產(chan)品：