A375+EGFP人惡(e)性(xing)黑色素(su)瘤(liu)細胞+EGFP

公司產品僅(jin)供科研研究(jiu)使(shi)用、不得用於臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生長(chang)至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮變(bian)圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長(chang)至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮變(bian)圓後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量的(de)凍存(cun)液（

FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置於凍存(cun)管中；

4）先將細胞凍存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中進行(xing)長期保(bao)存(cun)。使(shi)用程序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

細胞

3、細胞復蘇(su)：

1）從液(ye)氮(dan)中取(qu)出細胞凍存(cun)管（註意：佩(pei)戴(dai)防爆管(guan)面(mian)具(ju)），快(kuai)速將其(qi)置入 37℃水浴(yu)中解(jie)凍，直(zhi)至凍存(cun)管中無(wu)結

晶(jing)，然後用 75%的酒精(jing)擦拭(shi)凍(dong)存(cun)管(guan)外壁(bi)；

2）將(jiang)凍(dong)存管中的(de)細胞移(yi)至(zhi)含 6ml 培(pei)養(yang)基的 15ml 離(li)心管(guan)中， 1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)用 6ml 培(pei)養(yang)基重懸，接種(zhong) 25cm2培(pei)養(yang)瓶，於 37℃，5%CO2細胞培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

收到(dao)細胞後如(ru)何(he)操作(zuo):

1、首先，觀察細胞瓶是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏液、渾濁等(deng)現(xian)象(xiang)。若(ruo)有(you)，請及時與(yu)我(wo)司技術(shu)支(zhi)持聯(lian)系(xi)。

2、用75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分貼壁細胞會(hui)有(you)少(shao)量從瓶(ping)壁(bi)脫落(luo)，將細胞置於細胞培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置培(pei)養(yang)，隔(ge)天再(zai)取出進行(xing)觀察。

3、仔(zai)細閱讀細胞說明書，了(le)解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形態(tai)、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需細胞因子(zi)等(deng)。

4、可將(jiang)培(pei)養(yang)瓶內(nei)多余的(de)培(pei)養(yang)基轉移(yi)至(zhi)50ml無菌(jun)離(li)心管(guan)中，備用；細胞傳代(dai)時，可(ke)以將(jiang)該培(pei)養(yang)基按照壹(yi)定(ding)比例和客戶(hu)自(zi)備的培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)使(shi)用，讓(rang)細胞逐(zhu)漸(jian)適應培(pei)養(yang)條件。

5、確認細胞狀態(tai)良好(hao)後，應及時將細胞凍存(cun)，再進行(xing)後續(xu)的實驗(yan)，避免(mian)後(hou)期(qi)實驗(yan)失誤可能(neng)發生細胞汙(wu)染或死(si)亡而(er)導致的細胞丟失。

6、建議客戶(hu)收到(dao)細胞後前3天(tian)，100X、200X、400X各拍(pai)3-5張(zhang)細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀態(tai)，便於(yu)和我(wo)們技(ji)術支(zhi)持溝(gou)通交流(liu)。

細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍存處理(li)僅(jin)供參考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨產品說明書為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細胞懸液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄(qi)去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然後(hou)將所有(you)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或將(jiang)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第二(er)天換液(ye)並檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

    a、棄去培(pei)養(yang)上清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。        

    b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況而(er)定(ding)），然後在顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞大部(bu)分變(bian)圓並脫落(luo)，迅速拿回操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。        

     c、將細胞懸液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝入無菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄(qi)去上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

     b、根據(ju)細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液(ye)氮灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿取(qu)。  

公司正在(zai)出(chu)售的產品：

LDB3： LIM結構域(yu)結(jie)合(he)蛋(dan)白3抗(kang)體(ti) CL-0073DH82(犬(quan)巨(ju)噬(shi)細胞)5×106cells/瓶×2

FGF6 Protein Human 重組人 FGF6 / FGF-6 蛋(dan)白 大鼠腫瘤(liu)壞死(si)因子相關雕(diao)亡誘導配(pei)體(ti)4(AIL-R4)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Albumin /Cy3 熒光素(su)Cy3標記(ji) 0.1ml

LIMS2： ILK結合(he)蛋(dan)白LIMS2抗(kang)體(ti) CGB7 Others Human 人 CGB7 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

大鼠肝(gan)內(nei)膽管(guan)上皮細胞培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠腫瘤(liu)壞死(si)因子相關雕(diao)亡誘導配(pei)體(ti)4(AIL-R4)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 AACT/Cy3 熒光素(su)Cy3標記(ji)胰0.1ml

LNK： 淋巴(ba)細胞特異(yi)性(xing)接頭(tou)蛋(dan)白抗(kang)體(ti) QGY-7701, 人肝(gan)癌(ai)細胞 肝(gan)癌(ai)細胞,Hep3B細胞 Hs 578T(癌(ai)細胞)

GTSE-1： G2期/S期(qi)應答相關蛋(dan)白1抗(kang)體(ti) EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化(hua)的人B淋(lin)巴(ba)細胞;KMY0907

P3X63Ag8.653(小鼠骨髓(sui)瘤(liu)細胞) 5×106cells/瓶×2 人可(ke)溶(rong)性粘(zhan)附(fu)分(fen)子(zi)(Sam)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Mycobacterium bovis 結(jie)核桿菌(jun)菌(jun)體(ti)蛋(dan)白 0.5mg

GDF8： 生長(chang)分(fen)化(hua)因子(zi)8/肌(ji)肉(rou)抑制(zhi)素(su)抗(kang)體(ti) AMY2A Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴(hou) AMY2A / Alpha-amylase 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

肺微血(xue)管內(nei)皮細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次方(fang)(1ml) 人可(ke)溶(rong)性血(xue)小板(ban)內(nei)皮細胞粘(zhan)附(fu)分(fen)子(zi)1(sPECAM-1/sCD31)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 AMH/MIS Muellerian抑制(zhi)因(yin)子(zi)抗(kang)原(yuan) 1mg

phospho-GSK3 Alpha + Beta (Tyr279+Tyr216)： 0酸化(hua)糖原(yuan)合(he)酶激酶3α/β抗(kang)體(ti) 家貓肺細胞;FCA-L2 肝(gan)細胞，QSG-7701細胞 BC3H1細胞，小鼠腦(nao)瘤(liu)細胞

A375+EGFP人惡(e)性(xing)黑色素(su)瘤(liu)細胞+EGFP人喉(hou)癌(ai)上皮細胞;Hep-2 大鼠解整(zheng)合(he)素(su)樣(yang)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶8(ADAM8)ELISA試(shi)劑(ji)盒 IFN- Beta/IFNB(Mouse Interferon Beta)  小(xiao)鼠β幹擾(rao)素(su) 96T

Pecanex： 山核桃(tao)素(su)樣(yang)蛋(dan)白1抗(kang)體(ti) 貓腎(shen)細胞;CRFK

人胚(pei)胎絨毛(mao)細胞(HAF)(1×106 ) 細胞名(ming)稱 種(zhong)屬(shu) 大鼠解整(zheng)合(he)素(su)樣(yang)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶8(ADAM8)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CCK  大(da)鼠膽囊(nang)收縮素(su)/腸促(cu)肽(tai) 96T

phospho-PPAR alpha (Ser12)： 0酸化(hua)α型-過氧(yang)化(hua)酶活(huo)化(hua)增生(sheng)受(shou)體(ti)抗(kang)體(ti) 人虹(hong)膜(mo)色(se)素(su)上皮細胞總(zong)RNAHIPEpiC NA

CD70 Protein Rat 重組大(da)鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠解整(zheng)合(he)素(su)樣(yang)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶19(ADAM19)ELISA試(shi)劑(ji)盒 GM1(Human anti-ganglioside antibody)  人抗(kang)抗(kang)體(ti) S100A6 Others Human 人 S100A6 / CACY 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

三、培(pei)養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後首先觀察細胞瓶是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏液、渾濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及時和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說明書，了(le)解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形態(tai)、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需 細胞因子(zi)等(deng)，確保(bao)細胞培(pei)養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件不壹(yi)致(zhi)而(er)導致細胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及劇烈碰(peng)亡破碎形成碎片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察好(hao)細胞狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸 細胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養(yang)箱中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同條件的培(pei)養(yang)基用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收到(dao)細胞後前 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀態(tai)，便於(yu)和我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的情(qing)況，請及時和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以便(bian)我(wo)們的(de)技術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅供科研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不能(neng)再用來(lai)培(pei)養(yang)細胞，請換用按照(zhao)說明書細胞培(pei) 養(yang)條件新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後第壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。