A431(A-431)人表(biao)皮癌細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品僅供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回縮變圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶傳代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回縮變圓後(hou)加入培(pei)養(yang)液終

止消化，輕(qing)輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（

FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)中進行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降溫盒可直接(jie)放(fang)入-80℃。

細胞(bao)

3、細胞(bao)復(fu)蘇(su)：

1）從液氮(dan)中取出細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管（註(zhu)意(yi)：佩(pei)戴防爆管面(mian)具(ju)），快(kuai)速將其(qi)置(zhi)入 37℃水(shui)浴(yu)中解凍(dong)，直至凍(dong)存(cun)管中無(wu)結(jie)

晶，然後(hou)用 75%的(de)酒精(jing)擦拭凍(dong)存(cun)管外(wai)壁(bi)；

2）將凍(dong)存(cun)管中的(de)細胞(bao)移至含(han) 6ml 培(pei)養(yang)基(ji)的(de) 15ml 離心(xin)管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱用 6ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，接(jie)種(zhong) 25cm2培(pei)養(yang)瓶，於 37℃，5%CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

收(shou)到細胞(bao)後(hou)如何(he)操(cao)作(zuo):

1、首(shou)先(xian)，觀(guan)察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)。若(ruo)有(you)，請(qing)及時(shi)與我司(si)技術(shu)支(zhi)持(chi)聯(lian)系(xi)。

2、用75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)會有少(shao)量(liang)從(cong)瓶(ping)壁(bi)脫(tuo)落，將細(xi)胞(bao)置於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱內(nei)靜(jing)置(zhi)培(pei)養(yang)，隔天(tian)再取出進(jin)行(xing)觀察。

3、仔細閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關信息，如細胞(bao)形態、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu)細胞(bao)因(yin)子等(deng)。

4、可將培(pei)養(yang)瓶內多(duo)余的(de)培(pei)養(yang)基(ji)轉(zhuan)移至50ml無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，備用；細胞(bao)傳代時(shi)，可以將該(gai)培(pei)養(yang)基(ji)按(an)照壹(yi)定(ding)比(bi)例(li)和(he)客(ke)戶(hu)自備(bei)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)使(shi)用，讓細(xi)胞(bao)逐漸(jian)適(shi)應培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)。

5、確認細(xi)胞(bao)狀態良(liang)好(hao)後(hou)，應及時(shi)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)，再進(jin)行(xing)後(hou)續(xu)的(de)實(shi)驗(yan)，避(bi)免(mian)後(hou)期(qi)實(shi)驗(yan)失(shi)誤可能(neng)發生細胞(bao)汙染或(huo)死(si)亡而導致的(de)細胞(bao)丟失(shi)。

6、建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後(hou)前3天(tian)，100X、200X、400X各(ge)拍3-5張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於(yu)和(he)我們(men)技術(shu)支(zhi)持(chi)溝通(tong)交流。

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作步(bu)驟以隨貨產品說明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜）。第二天(tian)換液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

    a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。        

    b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化液(ye)浸(jin)潤所(suo)有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱中消化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並脫落，迅速拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。輕(qing)輕打勻後(hou)裝入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻。        

     c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

     b、根(gen)據細胞(bao)數量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便下(xia)次拿(na)取。  

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售的(de)產品：

Leupaxin： 樁(zhuang)蛋白(bai)抗(kang)體(ti) 小鼠胚胎成(cheng)纖維細(xi)胞(bao);NIH/3T3

B16-F10(小鼠(shu)皮(pi)膚(fu)黑(hei)色素(su)瘤細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人小(xiao)神經(jing)膠(jiao)質細胞(bao)HM 大鼠(shu)腫瘤壞死(si)因(yin)子相(xiang)關雕(diao)亡誘導配體(ti)1(AIL-R1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Biotin/HRP 辣根過氧化物(wu)酶標(biao)記(ji) 0.1ml

LRPAP1： 脂蛋(dan)白(bai)受體(ti)相(xiang)關蛋(dan)白/低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白相(xiang)關蛋(dan)白的(de)相(xiang)關蛋(dan)白1抗(kang)體(ti) CL-0065CoC1/DDP(人卵巢耐(nai)藥(yao)細(xi)胞(bao)亞(ya)株)5×106cells/瓶(ping)×2

FGF17 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 FGF17 蛋(dan)白(bai) 大鼠(shu)腫瘤壞死(si)因(yin)子相(xiang)關雕(diao)亡誘導配體(ti)(AIL)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Bovine IgG (親和(he)化) IgG 10mg

LEPREL2： 皮屑樣蛋白(bai)2抗(kang)體(ti) ALDH4A1 Others Human 人 ALDH4A1 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

HPV33 E6： 人類(lei)狀瘤病毒(du)33 E6蛋(dan)白抗(kang)體(ti) 人正(zheng)常(chang)肺(fei)上(shang)皮細胞(bao);BEAS-2B

COS-7(非洲綠(lv)猴SV40轉(zhuan)化的(de)腎細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小(xiao)鼠(shu)肥(fei)大(da)細胞(bao)瘤細胞(bao))5×106cells/瓶×2 正(zheng)常(chang)大鼠腎細胞(bao);NRK 人可溶(rong)性(xing)血管內(nei)皮細(xi)胞(bao)蛋白(bai)C受(shou)體(ti)(sEPCR)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Immunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1 免(mian)疫球(qiu)蛋白(bai)結(jie)合(he)蛋白-1 0.5mg

HEXB chain A： Beta基(ji)己糖苷酶beta亞(ya)基(ji)蛋(dan)白A鏈(lian)抗(kang)體(ti) EB病毒(du)轉(zhuan)化的(de)人B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);KMY0902

PA-1(人卵巢腺(xian)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人可溶(rong)性(xing)血管內(nei)皮生(sheng)長因(yin)子受體(ti)2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CD133 造(zao)血(xue)幹細胞(bao)抗(kang)原CD133 0.5mg

phospho-HSP70 (Tyr611)： 0酸(suan)化熱(re)休(xiu)克(ke)蛋(dan)白-70抗(kang)體(ti) PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

A431(A-431)人表(biao)皮癌細(xi)胞(bao)人皮(pi)膚(fu)黑(hei)色素(su)瘤細胞(bao);SK-MEL-1 大鼠(shu)解(jie)整(zheng)合(he)素金屬蛋(dan)白(bai)酶10(ADAM10)ELISA試(shi)劑(ji)盒 SAA(Mouse Serum amyloid A) 小(xiao)鼠(shu)血清澱粉(fen)樣蛋白(bai)A 96T

SCA14： 蛋白(bai)激(ji)酶C亞(ya)型G抗(kang)體(ti) 家貓腎細胞(bao);CATK1

人絨(rong)毛間(jian)葉(ye)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)(HVT)( 5×105 ) MCF-7(MCF7)(ATCC來(lai)源), 人癌細(xi)胞(bao) Human 大鼠(shu)睫(jie)狀(zhuang)神經(jing)營養(yang)因(yin)子(CF)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ACA(Mouse anti-centrol and centrosome antibody) 小(xiao)鼠(shu)抗(kang)中性粒(li)/中心體(ti)抗(kang)體(ti) 人心(xin)肌細(xi)胞(bao)-總RNAHCM-a NA

CD70 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大鼠(shu) CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽) 大(da)鼠睫(jie)狀(zhuang)神經(jing)營養(yang)因(yin)子(CF)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 6-K-PG  大(da)鼠(shu)6酮(tong)前(qian)列腺(xian)素 96T

Phospho-PKC gamma (Thr674)： 0酸(suan)化蛋(dan)白激酶C亞(ya)型G抗(kang)體(ti) HDAC8 Others Human 人 HDAC8 / HDACL1 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上述現(xian)象 發生請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關信息，如細胞(bao)形態、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若由於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分細胞(bao)由於溫(wen)度(du) 變化及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現象。觀察好(hao)細胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化，懸(xuan)浮細胞(bao)直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置於培(pei)養(yang)箱中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於(yu)和(he)我司(si)技術(shu)部溝通(tong) 交流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏感(gan)細胞(bao)會出現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的(de)技術(shu)人員跟蹤回訪直至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用按(an)照說(shuo)明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。