Bst 2.0 DNA聚(ju)合(he)酶(mei)(8U/ul)

公司產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使用(yong)、不得用(yong)於臨床診斷！

商(shang)品(pin)屬(shu)性

描 述 ：

該 酶(mei) 來(lai) 源(yuan) 於 Bacillus stearothermophilus DNAPolymerase I，通過基(ji)因工(gong)程手(shou)段去除(chu)了(le)其 5’-3’外切(qie)酶(mei)活性(xing)，而(er)保留(liu)了 5’-3’聚(ju)合(he)酶(mei)活性(xing)。該酶(mei)具(ju)有(you)很(hen)強(qiang)的鏈置換能(neng)力(li)，因此是(shi) Isothermal amplification (LAMP, RT-LAMP)的用(yong)酶(mei)。與(yu)野生型 Bst DNA 聚(ju)合(he)酶(mei)（大片(pian)段）相比，該酶(mei)在擴增速(su)度(du)、產量(liang)、耐鹽性(xing)和熱穩(wen)定性等(deng)方(fang)面(mian)均(jun)有(you)大幅(fu)提(ti)高(gao)，同(tong)時，該酶(mei)可(ke)以(yi)使用(yong) dUTP 作為(wei)底物(wu)進行擴增(Bst 大片(pian)段無此活性(xing))。

單(dan)位定義
壹(yi)個(ge)活力(li)單(dan)位即(ji)在 65°C 條件(jian)下(xia)，30 分鐘(zhong)內(nei)催化(hua) 10 nmoldNTP 的摻入(ru)反應(ying)成(cheng)為(wei)酸不(bu)溶(rong)性物(wu)質(zhi)所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)。
應(ying)用(yong)：
DNA 等(deng)溫(wen)擴增
富含 GC 結構的快速(su)測(ce)序(xu)
微(wei)量(liang)模(mo)板 DNA 的快速(su)測(ce)序(xu)
失(shi)活：
85°C，5min 失(shi)活。
儲(chu)存(cun)：-20℃可(ke)保存(cun) 3 年。
典(dian)型的 LAMP 反應(ying)
1. 按以下(xia)組分配制 LAMP 反應(ying)液(ye)
Bst 2.0 DNA Polymerase ( 8 U/μl) 0.25~1 μl
10×Isothermo Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100 mM Mg2+
X μl
dNTP Mixture (10 mM each) 3.5 μl
模(mo)板 DNA 10 ng~1 μg
*10X Primers 2.5 μl
ddH2O Up to 25 μl
*10X Primers：16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4-8 μM LpF/B each。
2. 65°C 30~60min; 85°C 5min 失(shi)活。
使用(yong)註(zhu)意(yi)事(shi)項：
(1) Mg2+的使用(yong)濃度(du)為(wei) 4~10 mM 濃度(du)，Isothermo Buffer中沒(mei)有(you) Mg2+，通(tong)常情(qing)況下，在 6-8mM Mg2+條件(jian)下(xia)可獲得較好的 LAMP 結果(guo)。
(2) 有(you)文(wen)獻(xian)報道加(jia)入(ru) Tte Uvrd 解(jie)旋(xuan)酶(mei)可(ke)改(gai)善 LAMP 的效果(guo)。
(3) 使用(yong)無模板 DNA 作為(wei)對照檢(jian)測(ce)擴(kuo)增的特異性(xing)。

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