瞬(shun)時轉染與穩定轉(zhuan)染，這(zhe)兩(liang)者都(dou)是(shi)將(jiang)目的(de)基(ji)因(yin)轉染至(zhi)特(te)定(ding)哺乳動物(wu)細胞(bao)內，進(jin)而(er)表達得(de)到目的(de)蛋(dan)白。但兩(liang)種方式在(zai)原(yuan)理，操(cao)作流(liu)程(cheng)等(deng)方面(mian)均(jun)有(you)所(suo)區(qu)別(bie)。

壹(yi)、實驗(yan)原(yuan)理：

瞬(shun)時轉染原理：外(wai)源基(ji)因(yin)並沒(mei)有(you)轉染到細胞(bao)的(de)染色(se)體(ti)上(shang)而是(shi)存(cun)在(zai)於(yu)遊離(li)的(de)載(zai)體(ti)上(shang),這(zhe)樣(yang)可以(yi)在(zai)短(duan)時(shi)間內獲得(de)基(ji)因(yin)的(de)表達產(chan)物(wu)，但是(shi)隨著細胞(bao)的(de)不斷分裂(lie)增殖外(wai)源基(ji)因(yin)最終會丟失(shi)，無法繼(ji)續(xu)進(jin)行重(zhong)組蛋(dan)白的(de)生(sheng)產。

穩定轉(zhuan)染原理：外(wai)源基(ji)因(yin)轉染至(zhi)細胞(bao)染色(se)體(ti)上(shang)，目的(de)基(ji)因(yin)不會隨著細胞(bao)傳代(dai)而(er)消(xiao)失(shi)，能夠(gou)長期(qi)穩定的(de)生(sheng)產目(mu)的(de)蛋(dan)白。通(tong)過(guo)穩定轉(zhuan)染(穩定細胞(bao)系構(gou)建(jian))能(neng)夠(gou)實現(xian)長(chang)期、穩定的(de)生(sheng)產重(zhong)組蛋(dan)白。

二(er)、操(cao)作步驟(zhou)

1、瞬(shun)時轉染與穩定轉(zhuan)染所(suo)用(yong)的(de)質(zhi)粒是不同的(de)，瞬轉(zhuan)的(de)質(zhi)粒不需要帶有(you)抗(kang)性，而用(yong)於(yu)穩定轉(zhuan)染的(de)質(zhi)粒壹定要(yao)帶有(you)特(te)定(ding)的(de)抗(kang)性以(yi)便於(yu)後(hou)續(xu)的(de)克隆株(zhu)篩選(xuan)。另(ling)外，兩(liang)者所(suo)用(yong)的(de)培養(yang)基(ji)及(ji)實驗(yan)試(shi)劑(ji)也有(you)所(suo)區(qu)別(bie)。

2、瞬(shun)時轉染的(de)操作比構建(jian)穩定細胞(bao)系的(de)操作簡單(dan)，構建(jian)好(hao)質(zhi)粒後(hou),經(jing)過(guo)細胞(bao)復蘇(su)、轉染、細胞(bao)培養(yang)、蛋(dan)白純(chun)化(hua)等(deng)步驟(zhou)即(ji)可(ke)得(de)到目的(de)蛋(dan)白;而(er)構建(jian)穩定細胞(bao)系需(xu)要(yao)先將(jiang)構建(jian)好(hao)的(de)質(zhi)粒線性化(hua)，再(zai)得入培(pei)養好(hao)的(de)哺乳動物(wu)細胞(bao)內，通(tong)過(guo)壹定(ding)的(de)轉染方式實現(xian)質(zhi)粒與細胞(bao)的(de)融合(he)，接(jie)著(zhe)經過(guo)細胞(bao)池篩(shai)選(xuan)、單(dan)克隆篩(shai)選(xuan)、細胞(bao)傳代(dai)培(pei)養等(deng)步驟(zhou)才(cai)能(neng)得(de)到穩定轉(zhuan)染的(de)細胞(bao)系。對(dui)穩定細胞(bao)系進(jin)行培養(yang)能夠(gou)長期(qi)穩定的(de)生(sheng)產目(mu)的(de)蛋(dan)白。

三(san)、特(te)點(dian)：

瞬(shun)時轉染：能夠(gou)快(kuai)速(su)生(sheng)產得(de)到微(wei)量至(zhi)中(zhong)量的(de)重(zhong)組蛋(dan)白；實驗(yan)成(cheng)本低；壹個宿(xiu)主可以(yi)帶有(you)多個拷貝(bei)，表達效(xiao)率高。

穩定細胞(bao)系構(gou)建(jian)：能夠(gou)長期(qi)穩定生(sheng)產目(mu)的(de)蛋(dan)白；得到穩轉株(zhu)之後(hou)後(hou)續(xu)生(sheng)產蛋(dan)白的(de)成(cheng)本降(jiang)低；

能(neng)夠(gou)對基(ji)因(yin)進(jin)行基(ji)因(yin)插入、基(ji)因(yin)敲(qiao)除(chu)等(deng)編輯(ji)操(cao)作。