HELA+LUC 人(ren)宮頸(jing)癌細(xi)胞(bao)熒光素(su)酶標記

公(gong)司產(chan)品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不得用於臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落，然後將(jiang)懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基重懸，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落，然後將(jiang)懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體操作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅速搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培養(yang)基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜（或將細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養上清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然後在(zai)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅(xun)速拿(na)回操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液按1:2比例(li)分(fen)到新的含(han)8 mL培養(yang)基的新皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取。

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾濁等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培養(yang)基、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹(yi)致，若由(you)於培養(yang)條件不壹(yi)致而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混勻(yun)收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的培(pei)養基重懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養基用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶收到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝通 交流。由(you)於運輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系，告知細(xi)胞(bao) 的具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤回訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能(neng)再用來培養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件新配制的培(pei)養基來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品：

MMP-28： 基質金屬(shu)蛋(dan)白酶28抗體 CM-H110人(ren)皮(pi)膚(fu)肥(fei)大細(xi)胞(bao)培(pei)養基100mL

IFNA2 Protein Cynomolgus 重(zhong)組食蟹猴(hou) IFNA2 / Ierferon alpha 2 蛋(dan)白 (His 標簽) 大鼠(shu)胰島(dao)素(su)受體底物(wu)1(IRS-1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MT/MLT (Rat Melatonin,MT/MLT)  大鼠(shu)褪(tui)黑素(su) 96T

MMP-23： 基質金屬(shu)蛋(dan)白酶23抗體 FGFR1 Others Human 人(ren) FGFR1 / CD331 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

大鼠(shu)冠(guan)狀(zhuang)動(dong)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 大鼠(shu)胰島(dao)素(su)受體β(ISR-β)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Hpt/HP (Rabbit Haptoglobin)  兔結(jie)合(he)珠蛋(dan)白/觸珠蛋(dan)白 96T

Mimitin： MYC誘(you)導線(xian)粒(li)體蛋(dan)白抗體 5-8F, 人(ren)高(gao)轉移(yi)鼻(bi)咽(yan)癌(ai)細(xi)胞(bao)系(xi) 淋(lin)巴(ba)瘤(liu),EL4IL-2細(xi)胞(bao) PC-12(大鼠(shu)腎(shen)上腺(xian)嗜鉻(ge)細(xi)胞(bao)瘤(liu))

C57BL/6小(xiao)鼠神(shen)經(jing)幹(gan)細(xi)胞(bao) Neural stem cells in C57BL/6 mice 人(ren)膠(jiao)原(yuan)交聯(PYD)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Caspase-12 半胱胺(an)酸蛋(dan)白酶蛋(dan)白-12(多(duo)肽) 0.5mg

HPV16-E7： 人(ren)類(lei)狀(zhuang)瘤(liu)病毒16-E7抗體 雪羊(yang)皮(pi)膚(fu)細(xi)胞(bao);SSHS1 大鼠(shu)雪(xue)旺細(xi)胞(bao)，RSC96細(xi)胞(bao) Ca761細(xi)胞(bao)，615小(xiao)鼠癌瘤(liu)株(zhu)

CD3D Others Human 人(ren) CD3d / CD3 delta 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 人(ren)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Caspase-12(hunman) 半胱胺(an)酸蛋(dan)白酶蛋(dan)白-12抗原(yuan)(人(ren)) 0.5mg

Hepsin： 跨膜(mo)蛋(dan)白酶絲酸1抗體 CL-0332Dami(人(ren)巨核(he)細(xi)胞(bao)白血病細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

SW1353細(xi)胞(bao)，人(ren)骨肉瘤(liu)細(xi)胞(bao) 島(dao)青(qing)黴(mei) 人(ren)胚胎(tai)肺成纖維(wei)細(xi)胞(bao);WI-38 人(ren)交聯物(PY)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 TmR2(GDNFR Beta;TRN-R;GFR-alpha-2;NTNR-2) 膠(jiao)質細(xi)胞(bao)系(xi)源性(xing)神(shen)經(jing)營養(yang)因子(zi)(多(duo)肽) 0.5mg

HELA+LUC  人(ren)宮頸(jing)癌細(xi)胞(bao)熒光素(su)酶標記PC-3人(ren)前列(lie)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao) Human prostate cancer PC-3 cells F-12培(pei)養基+10%FBS 大鼠(shu)過氧化(hua)物(wu)酶體增殖物(wu)激活受體α(PPARα)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MMP-1  大鼠(shu)基質金屬(shu)蛋(dan)白酶1 96T

PRMT4： 組(zu)蛋(dan)白精酸甲(jia)基轉移(yi)酶CARM1抗體 S100A2 Others Human 人(ren) S100A2 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

中(zhong)國倉(cang)鼠卵(luan)巢細(xi)胞(bao)(亞(ya)系克(ke)隆(long));DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1 大鼠(shu)過氧化(hua)物(wu)酶體增殖物(wu)激活受體α(PPAR-α)ELISA試(shi)劑(ji)盒 pANCA(Human Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody)  人(ren)抗中性(xing)粒(li)細(xi)胞(bao)核(he)周抗體 盤(pan)羊皮(pi)膚(fu)細(xi)胞(bao);ASHS3

小(xiao)鼠腹(fu)脊(ji)髓神(shen)經(jing)細(xi)胞(bao)(MN-vsc)(1×106) lovo, 人(ren)結腸(chang)癌細(xi)胞(bao) Human 大鼠(shu)過氧化(hua)物(wu)酶體增殖物(wu)激活受體α(PPAR-α)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 ACH(Mouse acetylcholine)  小鼠(shu)乙(yi)酰 96T

p107： 視(shi)網膜(mo)母細(xi)胞(bao)瘤(liu)樣蛋(dan)白p107抗體 星形細(xi)胞(bao)生(sheng)長添(tian)加(jia)物(wu)AGS