HET-1A人食(shi)管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞

公司產(chan)品僅供科研研究使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使之脫落，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進行分瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞使之脫落，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先將(jiang)細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中進行長期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處理僅(jin)供參(can)考(kao)，具體操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨產(chan)品說明(ming)書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入含適量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細(xi)胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部分變(bian)圓並脫落，迅速拿回操(cao)作臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生長狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行細(xi)胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

公(gong)司正在出(chu)售的(de)產(chan)品：

MUC15： 粘蛋(dan)白(bai)15抗體 小鼠(shu)胚胎成纖(xian)維(wei)細(xi)胞;PA317

Hs68(人男(nan)性正常細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 變(bian)異鏈球菌(jun) 大鼠胰(yi)島(dao)素(INS)ELISA試劑盒(he) IL-1 Alpha  魚類(lei)白(bai)介素1α 96T

MMP-22： 基(ji)質金屬蛋白(bai)酶22抗(kang)體 CM-H102表皮(pi)角化(hua)細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)100mL

IFNG Protein Ferret 重組雪貂(diao) IFNG / Ierferon Gamma 蛋白(bai) (His 標(biao)簽(qian)) 大鼠胰(yi)島(dao)素(INS)ELISA 試劑盒(he) ADV IgG 腺病毒(du) IgG 混(hun)合(he)型(xing)(間(jian)接法(fa)二(er)步(bu)法(fa))

MAG1： 肺癌轉(zhuan)移相(xiang)關(guan)蛋白(bai)抗體 CSF1R Others Human 人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 桿(gan)狀病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

T/G HA-VSMC(人血(xue)管(guan)平滑肌細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 人降(jiang)鈣素受體(C)ELISA 試劑盒(he) TRA16 激素受體相關(guan)蛋白(bai) 0.5mg

HIV1 p55+p24+p17： 艾(ai)滋病病毒(du)抗(kang)體 ROR1 Others Human 人 ROR1 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

人臍(qi)帶間(jian)質幹細(xi)胞 Human umbilical cord mesenchymal stem cells 人降(jiang)鈣素基(ji)因(yin)相(xiang)關(guan)肽(CGRP)ELISA 試劑盒(he) rh-IL-1Ra(Recombinant Human Interleukin-1 receptor antagonist His Tag) -1受體拮抗劑 100ug

H3N2 hemagglutinin： 流感病毒(du)H3N2血(xue)凝(ning)素抗體 盤羊(yang)皮(pi)膚(fu)細(xi)胞;ASHS2 中國(guo)倉(cang)鼠二(er)氫(qing)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)細(xi)胞，CHO/dhFr-細(xi)胞 Ca763細(xi)胞，615小鼠(shu)癌瘤株

CD3E Others Human 人 CD3e / CD3 epsilon 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 人(ren)降鈣素(CT)ELISA 試劑盒(he) E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大腸桿(gan)菌(jun)菌體蛋白(bai) 0.5mg

HET-1A人食(shi)管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞HeLa人細(xi)胞 Human cervix cancer HeLa cells DMEM+10% FBS 大鼠果(guo)糖(tang)二(er)0酸(suan)縮酶(mei)C(ALDOC)ELISA試劑盒(he) aPT1/aPT2(Human anti-prothrombins antibodies)  人抗(kang)凝血素抗體 S100A1 Others Human 人 S100A1 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

中國(guo)倉(cang)鼠卵巢細(xi)胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 大鼠果(guo)糖(tang)二(er)0酸(suan)縮酶(mei)B(ALDOB)ELISA試劑盒(he) MMP-13  大鼠基(ji)質金屬蛋白(bai)酶13 96T

PRMT6： 組蛋白(bai)精酸(suan)甲基(ji)轉(zhuan)移酶(mei)6抗體 山羊(yang)腎(shen)上皮樣細(xi)胞;DG-K1

小鼠(shu)背(bei)部(bu)脊髓(sui)神(shen)經(jing)元(yuan)(MN-dsc)(1×106) DU 145, 人前列腺癌細(xi)胞 Human 大鼠果(guo)糖(tang)二(er)0酸(suan)縮酶(mei)A(ALDOA)ELISA試劑盒(he) LIFR(Mouse leukemia inhibitory factor receptor)  小鼠(shu)白(bai)血病抑制(zhi)因(yin)子(zi)受體 96T

PRSS8： 絲酸蛋(dan)白(bai)酶8抗(kang)體 平滑肌細(xi)胞生長添(tian)加(jia)物-無血(xue)清(qing)SMCGS-sf

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞後(hou)首先觀察細(xi)胞瓶是否(fou)完好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞說明(ming)書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相關(guan)信息(xi)，如細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保細(xi)胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細(xi)胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰(peng)亡破碎(sui)形成碎片，是正常(chang)現象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接混(hun)勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞，並接種到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記錄細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏(min)感細(xi)胞會出(chu)現不(bu)穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供科研使用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換用按照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。