HKb-20人(ren)腎上皮細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得用(yong)於臨(lin)床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進行長期保存。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可直接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供參考，具(ju)體操作步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上清，用(yong)不含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓並脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好(hao)時，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心管中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培養(yang)註(zhu)意事項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現象(xiang)，若有(you)上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確保細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致而(er)導致細(xi)胞(bao)出(chu)現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度 變化(hua)及劇烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件的培養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請及(ji)時和我(wo)們聯系，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪直至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的產(chan)品：

Matriptase 2： 膜型(xing)絲(si)酸(suan)蛋白(bai)酶2抗體 EB病毒轉(zhuan)化(hua)的人(ren)B淋(lin)巴細(xi)胞(bao);KM9402

AZ-521人(ren)胃(wei)癌細(xi)胞(bao) Human gasic cancer cells AZ-521 MEM+10% FBS 大(da)鼠血(xue)小(xiao)板因子(zi)4(PF-4/CXCL4)ELISA 試(shi)劑盒 I CTP  大(da)鼠Ⅰ型(xing)膠原(yuan)交(jiao)聯羧基(ji)末(mo)端肽(tai) 96T

MRP8+MRP14： 多藥(yao)耐(nai)藥(yao)相(xiang)關(guan)蛋白(bai)8/9/14抗體 HA Others H3N2 甲型(xing)流感 H3N2 (A/Brisbane/10/2007) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao))

肺成纖維(wei)細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml) 大(da)鼠血(xue)小(xiao)板因子(zi)4(PF4)ELISA試(shi)劑盒 Tn-T (Rat Troponin T,Tn-T ) 大(da)鼠肌(ji)鈣蛋白(bai)T 96T

MOBKL2B： Mob1同源(yuan)蛋白(bai)MOBKL2B抗體 小鼠神經母細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao);Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]

H2BFWT： H2B組蛋白(bai)家族成員W蛋白(bai)抗體 HA Others H5N1 甲型(xing)流感 H5N1 (A/duck/Hunan/795/2002) 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao))

人(ren)永生(sheng)化(hua)淋(lin)巴細(xi)胞(bao);CNLMG-B5538LC 人(ren)基(ji)質裂(lie)解素(su)(ST2)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CCL26(Eotaxin 3) 嗜酸(suan)粒(li)細(xi)胞(bao)趨化(hua)蛋白(bai)3抗原(yuan) 0.5mg

HDGFL1： PWWP域包含(han)蛋白(bai)1抗體 穩定表達(da)EBNA1的人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao);293E

HT-1080(人(ren)纖(xian)維肉瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 LX-2, 人(ren)肝(gan)星(xing)形(xing)細(xi)胞(bao)株(zhu) EB病毒轉(zhuan)化(hua)的人(ren)B淋(lin)巴細(xi)胞(bao);KM9401 人(ren)基(ji)質裂(lie)解素(su)(ST1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CCR-1(CC chemokine receptor 1) 細(xi)胞(bao)表面趨化(hua)因子(zi)受體1抗原(yuan) 0.5mg

HDL： 高密(mi)度(du)脂蛋白(bai)抗體 人(ren)主(zhu)動脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)cDNAHAEC cDNA

HKb-20人(ren)腎上皮細(xi)胞(bao)P2Y10： G蛋白(bai)偶聯受體p2y10抗體 GYPA Others Human 人(ren) GYPA / CD235a / Glycophorin A 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao))

L1210瘤 淋(lin)巴白(bai)血(xue)病 大鼠骨(gu)堿性(xing)0酸酶(mei)(BALP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 TNF- Beta  大鼠壞(huai)死因子(zi)β 96T

PACAP-27/38： 腺苷(gan)酸環化(hua)酶激活肽(tai)-27/38抗體 NCI-H1563[H1563]細(xi)胞(bao)，人(ren)胚(pei)肺細(xi)胞(bao) 人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao),2V6.11細(xi)胞(bao) 人(ren)少(shao)突(tu)膠質前體細(xi)胞(bao)-懸(xuan)浮(fu)生(sheng)長HOPC-os

IFNG Others Mouse 小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao)) 大(da)鼠骨(gu)骼肌(ji)慢(man)肌(ji)肌(ji)鈣蛋白(bai)T(TN1)ELISA試劑(ji)盒 CT(Human Chlamydia trachomatis)  人(ren)沙眼衣(yi)原(yuan)體(ti) 96T

p19ARF： p19ARF抑(yi)癌基(ji)因抗體 CM-M032小鼠腸(chang)靜脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)100mL