HL-7702L-02人(ren)肝細(xi)胞

公(gong)司產品僅供(gong)科研研究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將細胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期保存。使用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操作步驟(zhou)以(yi)隨貨產(chan)品說明書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混合(he)均勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸液加(jia)入含(han)適(shi)量培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分變圓並(bing)脫落，迅速拿回操(cao)作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良(liang)好時，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細胞及細胞(bao)培(pei)養液，裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次拿取。

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察細胞瓶(ping)是否(fou)完好，培(pei)養液是否(fou)有漏液、渾濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生請(qing)及時和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞形態、所用(yong)培(pei)養基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞培(pei)養條件(jian)壹(yi)致，若由於培(pei)養條件(jian)不(bu)壹致而導致細胞(bao)出現問題，責(ze)任由 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表面，顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分(fen)細胞(bao)由於溫度(du) 變化及劇(ju)烈碰亡破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細胞直(zhi)接混勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接種到新的(de)培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條件(jian)的(de)培(pei)養基用(yong)於細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細胞(bao)狀態，便(bian)於(yu)和我司技術部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定的情況(kuang)，請(qing)及時和我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到細胞(bao)後(hou)第壹(yi)次傳代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正在出售(shou)的產(chan)品：

MYLIP： 低密(mi)度(du)脂(zhi)蛋白(bai)受(shou)體(ti)的(de)誘(you)導降解(jie)蛋白(bai)抗(kang)體 HL-60, 人(ren)早幼粒(li)白(bai)血(xue)病細胞(bao) 單(dan)核(he)細胞-巨(ju)噬(shi)細胞,RAW264.7細胞(bao) Hep G2(人肝(gan)癌(ai)細(xi)胞)

RBP4 Others Canine 狗(gou) RBP4 人細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 大鼠(shu)血(xue)小(xiao)板(ban)衍(yan)生(sheng)生長因(yin)子(zi)可(ke)溶(rong)性(xing)受(shou)體(ti)α(PDGFsR-α)ELISA試(shi)劑盒 Fish Cortisol  魚類 96T

ZNF： 鋅指(zhi)蛋白(bai)抗(kang)體 EB病毒轉化的人B淋巴細胞(bao);KM932

COS-7非洲綠猴SV40轉化的腎細胞 Renal cell COS-7 in African green monkey SV40 ansformation DMEM培(pei)養基+10%FBS 大鼠(shu)血(xue)小(xiao)板(ban)衍(yan)生(sheng)生長因(yin)子(zi)可(ke)溶(rong)性(xing)受(shou)體(ti)α(PDGFsR-α)ELISA 試(shi)劑盒 CD8 大(da)鼠CD8分(fen)子(zi) 96T

MYF5： 生肌(ji)決定因(yin)子(zi)Myf5抗(kang)體(ti) HA Others Influenza B 乙(yi)型流感(gan) (B/Florida/4/2006) 血(xue)凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao))

HAUS5： HAUS5蛋白(bai)抗(kang)體 CL-0267CNE-2Z(人(ren)鼻(bi)咽癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

FBM細胞(bao)，胎兒骨髓間(jian)充(chong)質(zhi)細胞 嬰兒雙歧(qi)桿(gan)菌(jun) EB病毒轉化的人B淋巴細胞(bao)(拉(la)祜(hu)族(zu));KM9406 人(ren)基質(zhi)金屬蛋白(bai)酶抑(yi)制(zhi)因(yin)子(zi)3(TIMP-3)ELISA 試(shi)劑盒 CCR-6/CD196 peptide 細(xi)胞表(biao)面趨(qu)化因(yin)子(zi)受(shou)體(ti)6抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HRH4/GPCR105： 組織(zhi)胺(an)H4受(shou)體(ti)抗(kang)體(ti) HA Others H5N1 甲型流(liu)感(gan) H5N1 (A/Egypt/2321-NAMRU3/2007) 血(xue)凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao))

人胚(pei)肺(fei)二倍體細胞(bao);HL 人基質(zhi)金屬蛋白(bai)酶抑(yi)制(zhi)因(yin)子(zi)2(TIMP-2)ELISA 試(shi)劑盒 CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide 細(xi)胞表(biao)面趨(qu)化因(yin)子(zi)受(shou)體(ti)6抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HCM： mRNA cap甲基轉移(yi)酶抗(kang)體 表達SV40T和(he)EBNA1的人(ren)胚(pei)腎細胞;293ET

HL-7702[L-02]人肝(gan)細胞(bao)P311 protein： 神(shen)經再(zai)生相(xiang)關(guan)蛋白(bai)抗(kang)體 間(jian)充(chong)質(zhi)幹(gan)細(xi)胞脂肪細(xi)胞(bao)分(fen)化培(pei)養基MADM

LGALS1 Protein Rat 重組(zu)大鼠(shu) Galectin-1 / LGALS1 蛋白(bai) 大(da)鼠骨(gu)鈣素/骨谷(gu)酸(suan)蛋白(bai)(OT/OCN/BGP)ELISA 試(shi)劑盒 TRAIL-R1  大(da)鼠壞(huai)死因(yin)子(zi)相(xiang)關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導配(pei)體1 96T

P38 MAPK： 原活(huo)化蛋白(bai)激(ji)酶p38α抗(kang)體 RAB27B Others Human 人 RAB27B 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao))

L6565 小鼠(shu)白(bai)血(xue)病克隆(long)細(xi)胞系 大鼠(shu)骨(gu)鈣素/骨谷(gu)酸(suan)蛋白(bai)(OT/BGP)ELISA試(shi)劑盒 Pim1(Human proviral integration site 1)  人(ren)前(qian)病毒整(zheng)合(he)位點1 96T

proCNP： 促(cu)尿排(pai)泄(xie)肽(tai)前(qian)體(ti)C抗體(ti) NCI-H2170[H2170]細(xi)胞(bao)，人肺(fei)鱗狀細胞(bao)癌(ai) 人(ren)胚(pei)腎二倍體細胞(bao),CCC-HEK-1細胞(bao) 人腦(nao)幹(gan)星(xing)形膠質(zhi)細胞HA-bs