人檢(jian)測試劑(ji)盒(he)註意(yi)事項
1.試劑(ji)盒(he)從冷藏(zang)環(huan)境(jing)中取出(chu)應在室溫平衡(heng) 15-30 分鐘後方(fang)可使(shi)用,酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板開封(feng)後(hou)如(ru)未用完(wan),板條應裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋(dai)中保存(cun)。
2.濃(nong)洗滌液可能(neng)會(hui)有(you)結(jie)晶(jing)析(xi)出(chu),稀(xi)釋(shi)時(shi)可在水(shui)浴中加溫助(zhu)溶(rong),洗滌時(shi)不(bu)影響(xiang)結(jie)果(guo)。
3.各(ge)步(bu)加樣均應使(shi)用加樣器(qi),並(bing)經常(chang)校(xiao)對(dui)其準確性(xing),以避(bi)免(mian)試驗(yan)誤(wu)差。壹(yi)次加樣時(shi)間控制(zhi)在 5 分鐘內,如(ru)標(biao)本(ben)數(shu)量多,使(shi)用排(pai)槍加樣。
4.請(qing)每(mei)次測定的(de)同時(shi)做標準曲(qu)線(xian),做復孔(kong)。如(ru)標(biao)本(ben)中待測物質(zhi)含量過高(gao)(樣(yang)本(ben)OD 值(zhi)大於標準品孔(kong)*孔(kong)的OD 值(zhi)),請(qing)先(xian)用樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍數(n 倍)後再測定,計(ji)算時(shi)請(qing)後(hou)乘(cheng)以(yi)總稀(xi)釋(shi)倍數(×n×5)。
5.封(feng)板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次性(xing)使(shi)用,以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。
6.底物請(qing)避(bi)光保存。
7.嚴格(ge)按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)的(de)操(cao)作進行,試驗(yan)結(jie)果(guo)判(pan)定必(bi)須(xu)以(yi)酶標儀讀數(shu)為(wei)準.
8.所有(you)樣(yang)品,洗滌液和各(ge)種廢棄(qi)物都(dou)應按傳(chuan)染物處(chu)理。
人檢(jian)測試劑(ji)盒(he)操(cao)作步(bu)驟
1.標準品的(de)稀(xi)釋(shi):本(ben)試劑(ji)盒(he)提供(gong)原(yuan)倍標準品壹(yi)支,用戶(hu)可按(an)照(zhao)下(xia)列圖表在小(xiao)試管中進行稀(xi)釋(shi)。
2.加樣:分別設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)(空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加樣品(pin)及(ji)酶標試劑(ji),其(qi)余各(ge)步(bu)操(cao)作相(xiang)同)、標準孔、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔。在酶標包(bao)被(bei)板上(shang)標(biao)準品準確加樣 50µl,待(dai)測樣(yang)品(pin)孔中先加樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液 40µl,然(ran)後(hou)再加待測樣(yang)品(pin) 10µl(樣品(pin)終稀(xi)釋(shi)度為(wei) 5 倍)。加樣將(jiang)樣(yang)品加於酶(mei)標(biao)板孔底部,盡量不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi),輕輕晃(huang)動(dong)混勻(yun)。
3.溫(wen)育(yu):用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後置(zhi) 37℃溫(wen)育 30 分鐘。
4.配(pei)液:將 30 倍濃縮(suo)洗滌液用蒸(zheng)餾(liu)水(shui) 30 倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備用
5.洗滌:小(xiao)心(xin)揭掉(diao)封(feng)板膜(mo),棄(qi)去(qu)液體,甩幹,每孔(kong)加滿洗滌液,靜(jing)置(zhi) 30 秒後棄(qi)去(qu),如(ru)此(ci)重復 5 次(ci),拍幹。
6.加酶:每(mei)孔(kong)加入酶標(biao)試劑(ji) 50µl,空(kong)白(bai)孔(kong)除外。
7.溫育(yu):操(cao)作同 3。
8.洗滌:操(cao)作同 5。
9.顯色(se):每孔(kong)先(xian)加入顯色(se)劑 A50µl,再加入顯色(se)劑 B50µl,輕輕震蕩(dang)混勻(yun),37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止(zhi):每孔加終止(zhi)液 50µl,終止(zhi)反(fan)應(此時(shi)藍(lan)色立轉黃色)。
11.測定:以(yi)空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling),450nm 波長(chang)依序(xu)測量各(ge)孔的(de)吸光度(OD 值(zhi))。 測定應在加終止(zhi)液後 15 分鐘以內進行。