培(pei)養(yang)基(ji)是(shi)將(jiang)微(wei)生物(wu)生長(chang)繁(fan)殖所(suo)需要(yao)的(de)各種營養(yang)物(wu)質(zhi)，用人工(gong)方(fang)法(fa)配制而(er)成(cheng)的(de)各種營養(yang)基(ji)質。培(pei)養(yang)基(ji)為(wei)微(wei)生物(wu)的(de)生長(chang)提(ti)供(gong)營養(yang)物(wu)質(zhi)和(he)生存(cun)空(kong)間(jian)。
 

　　滅菌的(de)方(fang)法(fa)，通常(chang)可(ke)以(yi)分(fen)為(wei)四大(da)類(lei)：
 

　　1、加(jia)熱(re)滅菌：包括(kuo)直接(jie)灼(zhuo)燒(shao)滅菌、幹(gan)熱(re)滅菌、加(jia)壓蒸(zheng)汽滅菌、間(jian)歇(xie)滅菌和(he)煮(zhu)沸(fei)消(xiao)毒；
 

　　2、過濾(lv)去(qu)菌；
 

　　3、射(she)線滅菌和(he)消(xiao)毒；
 

　　4、化(hua)學(xue)藥劑(ji)滅菌和(he)消(xiao)毒。
 

　　在本(ben)實驗(yan)中，介(jie)紹與(yu)培(pei)養(yang)基(ji)和(he)玻璃器(qi)材(cai)滅菌有(you)關(guan)的部(bu)份滅菌方(fang)法(fa)。
 

　　1. 幹(gan)熱滅菌法(fa)（即熱空氣(qi)滅菌法(fa)）
 

　　幹(gan)熱滅菌壹(yi)般(ban)是(shi)利用(yong)電熱(re)烘(hong)箱(xiang)作(zuo)為(wei)幹熱(re)滅菌器(qi)。前(qian)面(mian)所(suo)包裝(zhuang)好的(de)玻璃器(qi)皿(min)，如帶(dai)棉(mian)塞的三(san)角瓶(ping)，試(shi)管(guan)、包裝(zhuang)好的(de)吸管(guan)、培養(yang)皿(min)等(deng)，放入(ru)電(dian)熱(re)烘箱(xiang)中(zhong)。
 

　　打(da)開烘(hong)箱(xiang)頂(ding)部(bu)的(de)通氣(qi)孔，接(jie)上(shang)電源(yuan)加(jia)熱，使(shi)箱(xiang)內(nei)空(kong)氣(qi)的溫度達到160℃~170℃，關閉(bi)通氣(qi)孔使(shi)箱(xiang)內(nei)的(de)溫(wen)度保(bao)持(chi)在160℃左(zuo)右並(bing)維(wei)持(chi)1.5-2h。時(shi)間(jian)壹(yi)到(dao)，切斷(duan)電源(yuan)。待(dai)溫(wen)度下降60℃~70℃以(yi)下，方(fang)可(ke)打(da)開箱(xiang)門(men)取滅菌物(wu)品，否則驟(zhou)冷(leng)後易(yi)使箱(xiang)內(nei)玻璃儀器破損(sun)。
 

　　2. 加壓蒸(zheng)氣滅菌法(fa)
 

　　利用(yong)高壓滅菌器(qi)，使(shi)水(shui)的(de)沸(fei)點在(zai)密(mi)閉的(de)滅菌器(qi)內(nei)隨壓力升(sheng)高(gao)而(er)增高(見(jian)表(biao)6-2)，來提(ti)高蒸(zheng)汽的(de)溫度和(he)滅菌的(de)效(xiao)率。
 

　　在同壹溫(wen)度下濕熱的殺菌效(xiao)率比(bi)幹(gan)熱(re)大(da)，因(yin)為(wei)微(wei)生物(wu)細(xi)胞(bao)蛋白質在(zai)濕熱情況下，易(yi)幹凝固(gu)(見(jian)表6-3)。同時(shi)濕熱的穿(chuan)透力(li)強，當水(shui)蒸(zheng)汽與(yu)被(bei)滅菌的(de)物(wu)品相接觸(chu)後，便放(fang)出汽(qi)化(hua)潛熱，逐(zhu)步提(ti)高被(bei)滅菌物(wu)品的溫度，直至(zhi)與(yu)水(shui)蒸(zheng)汽的(de)溫度相等(deng)，達到平衡(heng)為(wei)止(zhi)，從而(er)提(ti)高滅菌效(xiao)率。
 

　　手提(ti)式(shi)高壓滅菌鍋(guo)滅菌的(de)操(cao)作步驟(zhou)如(ru)下：
 

　　(1)、在滅菌器(qi)內(nei)加入(ru)壹定量的(de)水(shui)(有(you)的(de)滅菌器(qi)內(nei)加水(shui)至(zhi)止(zhi)水(shui)線)。將(jiang)用(yong)防(fang)水(shui)紙包紮好的(de)滅菌物(wu)品如培養(yang)基(ji)、無菌水(shui)等(deng)，放(fang)進(jin)滅菌器(qi)內(nei)。
 

　　(2)、接通電(dian)源(yuan)，進(jin)行加熱。
 

　　(3)、當壓力到(dao)達5bl/in2時(shi)，打(da)開放(fang)氣閥(fa)，使(shi)鍋(guo)內的空氣(qi)和(he)水(shui)蒸(zheng)汽壹(yi)同排出，直至(zhi)壓力表(biao)的(de)壓力恢復(fu)到(dao)零，然(ran)後(hou)關閉排氣(qi)閥(fa)，繼(ji)續加熱(re)。
 

　　(4)、當壓力表(biao)*的(de)壓力到(dao)達15bl/in2(即 1.05kg/cm2)時(shi)，此(ci)時(shi)滅菌器(qi)內(nei)的溫(wen)度達到121℃，維(wei)持(chi)30min不變(bian)。對(dui)熱(re)不穩定(ding)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)滅菌時(shi)，應(ying)適當降低壓力，延(yan)長(chang)時(shi)間(jian)。
 

　　(5)、滅菌時(shi)間(jian)壹(yi)到(dao)，切斷(duan)電源(yuan)，待(dai)壓力下降至(zhi)零時(shi)，才(cai)能(neng)打開排(pai)氣孔，然(ran)後(hou)打開滅菌器(qi)蓋(gai)，取出物(wu)品。如果滅菌後(hou)的(de)固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)要(yao)做(zuo)成(cheng)斜面，需(xu)趁(chen)熱放(fang)置。還(hai)需(xu)檢查(zha)培養(yang)基(ji)滅菌是(shi)否(fou)徹(che)di。
 

　　3. 間歇(xie)滅菌法(fa)
 

　　常(chang)采(cai)用(yong)阿諾(Arnold)氏滅菌器(qi)和(he)柯(ke)赫(Koch)氏滅菌器(qi)或蒸(zheng)籠(long)滅菌，常(chang)壓條件(jian)下蒸(zheng)汽溫(wen)度不超(chao)過(guo)100℃。在(zai)沒(mei)有高(gao)壓滅菌器(qi)設(she)備的(de)情(qing)況下或不宜(yi)加(jia)壓滅菌的(de)物(wu)品，可(ke)采(cai)用(yong)此法滅菌。
 

　　方(fang)法(fa)是(shi)：待(dai)滅菌物(wu)品放在滅菌器(qi)或蒸(zheng)籠(long)裏(li)，每(mei)d蒸(zheng)煮(zhu)1次，每(mei)次煮(zhu)沸(fei)lh，連續3d重復(fu)進(jin)行。在每(mei)兩次蒸(zheng)煮(zhu)之間，將(jiang)物(wu)品(指培養(yang)基(ji))放在(zai)37C恒溫條(tiao)件(jian)下培養(yang)過(guo)夜(ye)，這(zhe)樣可(ke)以(yi)使每(mei)次蒸(zheng)煮(zhu)後未殺死(si)的殘留(liu)芽孢萌發(fa)成(cheng)營養(yang)體(ti)，以(yi)便下1次蒸(zheng)煮(zhu)時(shi)殺滅。
 

　　4. 過濾(lv)除菌法(fa)
 

　　壹(yi)些不能(neng)加熱(re)滅菌的(de)液體物(wu)質(zhi)(如維(wei)生素(su)、血清(qing))，可(ke)以(yi)用過(guo)濾除菌法(fa)，壹(yi)般用(yong)細菌過(guo)濾(lv)器進(jin)行除菌。(教(jiao)師(shi)示範)
 

　　細(xi)菌過(guo)濾(lv)器中(zhong)的過濾板常(chang)用陶(tao)瓷、矽(gui)藻土(tu)或石(shi)棉等(deng)做成(cheng)，過(guo)濾板(ban)孔眼(yan)很(hen)小(xiao)，細菌不能(neng)通過(guo)。因(yin)此，過(guo)濾(lv)後(hou)的(de)液體就(jiu)除去(qu)了(le)細(xi)菌。在(zai)進(jin)行過濾除菌前(qian)，整(zheng)個細菌過(guo)濾(lv)器和(he)接(jie)受液體的(de)器(qi)皿，必須(xu)要(yao)包裝(zhuang)妥(tuo)當並進行加壓蒸(zheng)汽滅菌後(hou)方(fang)可(ke)使(shi)用(yong)。
 

　　下面介(jie)紹石(shi)棉板(ban)濾器的構(gou)造及(ji)其(qi)操作(zuo)方(fang)法(fa)。石(shi)棉板(ban)濾器又稱(cheng)蔡氏(Scitz)濾器，它是(shi)由(you)石(shi)棉制成(cheng)的(de)圓形(xing)濾板(ban)和(he)壹(yi)個特制漏鬥(dou)組成(cheng)。此(ci)漏鬥(dou)分(fen)上(shang)下兩節(jie)。上(shang)節為(wei)圓形(xing)金(jin)屬(shu)筒(tong)，下節為(wei)金屬(shu)漏(lou)鬥(dou)。兩(liang)節由三個活動(dong)螺旋固(gu)定(ding)，便於(yu)裝卸(xie)。使(shi)用(yong)時(shi)拆開兩(liang)節，將(jiang)濾(lv)板(ban)放(fang)在漏鬥上(shang)的金(jin)屬(shu)篩(shai)板，再(zai)加(jia)上(shang)上(shang)節，然(ran)後(hou)將(jiang)螺(luo)旋扭緊(jin)，將(jiang)欲(yu)濾溶液置於(yu)濾器(qi)中(zhong)抽濾(lv)。每(mei)次過濾(lv)必須(xu)用(yong)壹(yi)張無(wu)菌的(de)新(xin)濾板(ban)。石(shi)棉板(ban)濾器因(yin)容(rong)積(ji)大(da)小(xiao)不同而(er)有(you)各種型號，石(shi)棉板(ban)也有不同規(gui)格型號使(shi)用時(shi)必須(xu)根據需(xu)要(yao)搭(da)配妥(tuo)當。
 

　　5. 紫外線滅菌
 

　　波(bo)長(chang)260~280nm之間的(de)紫外線有(you)很強的殺菌能(neng)力，壹(yi)般(ban)紫外燈管(guan)能(neng)產(chan)生253.7nm的(de)紫(zi)外光，殺死(si)力強而(er)穩定(ding)，但(dan)穿(chuan)透力(li)弱壹般(ban)只適宜(yi)物(wu)體(ti)表(biao)面、空(kong)氣(qi)滅菌。例如接種室(shi)、培養(yang)室(shi)、手術室(shi)、藥廠包裝(zhuang)室(shi)等空(kong)氣滅菌。壹(yi)般(ban)30w燈管(guan)、9m3空間，距(ju)地(di)面(mian)2m每(mei)次打開紫(zi)外線照射0.5h，就使室(shi)內空(kong)氣滅菌。若照射紫外線時(shi)，先(xian)噴灑石(shi)碳(tan)酸(suan)等化(hua)學(xue)消(xiao)毒劑(ji)，可(ke)增強滅菌效(xiao)果。
 

　　在(zai)進行微(wei)生物(wu)接(jie)種和(he)分(fen)離等(deng)操作時(shi)，常(chang)須(xu)用(yong)紫(zi)外線來(lai)殺滅接種室(shi)(箱(xiang))空(kong)氣(qi)、臺(tai)面等處的(de)微(wei)生物(wu)。
 

　　紫(zi)外線雖有較(jiao)強的殺菌力(li)，但(dan)穿(chuan)透力(li)較弱，即使壹薄(bo)層(ceng)玻璃或水(shui)層(ceng)就能(neng)將(jiang)大(da)部(bu)分(fen)紫外線濾(lv)除，因(yin)此只適用於(yu)空氣(qi)及(ji)表(biao)面殺菌。
 

　　紫(zi)外線對(dui)眼粘(zhan)膜(mo)及(ji)視神(shen)經有(you)強烈(lie)的(de)損(sun)傷作(zuo)用，對(dui)皮膚有刺(ci)激作(zuo)用(yong)，所(suo)以(yi)不能(neng)直接(jie)在(zai)紫外線燈(deng)開啟(qi)下工(gong)作和(he)用(yong)眼(yan)睛(jing)直視(shi)開啟(qi)的紫(zi)外燈。
 

　　6. 化(hua)學(xue)藥劑(ji)消(xiao)毒滅菌
 

　　微(wei)生物(wu)實驗(yan)室(shi)中常(chang)用的(de)化(hua)學(xue)殺菌劑(ji)有升(sheng)、甲醛、酒精(jing)、碘酒(jiu)、龍(long)膽紫(zi)、石(shi)炭酸(suan)、漂白(bai)粉、新潔(jie)爾(er)滅、煤(mei)酚(fen)皂(zao)溶液，它們(men)有的(de)是(shi)殺菌劑(ji)，有的(de)是(shi)抑(yi)菌劑(ji)。