J.gamma1人急(ji)性(xing)T細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病細胞(bao)

公(gong)司(si)產品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用於臨(lin)床診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中的培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然後按 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中的培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存管(guan)中；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進行(xing)長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以下細胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處(chu)理(li)僅供(gong)參考，具體(ti)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻(yun)。然後將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶中培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可進行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而(er)定），然後在顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落，迅速拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)養瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻(yun)。

c、將細胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分到新的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新皿中或(huo)者瓶(ping)中，置於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去上清(qing)液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下次拿取(qu)。

三(san)、培(pei)養註意(yi)事項 

1. 收到細胞(bao)後首先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱讀細胞(bao)說明(ming)書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關信息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血(xue)清比例(li)、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子等，確保細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而(er)導致細胞(bao)出現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸浮細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮的培(pei)養基(ji)重懸 細胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置於培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到細胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便於和(he)我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定的情況，請及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體情況，以便我們(men)的技(ji)術人員跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的培(pei)養基(ji) (灌液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培(pei)養細胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細胞(bao)。     收到細胞(bao)後第壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。

公司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產品：

MARK4： 絲(si)酸/蘇酸蛋(dan)白(bai)激(ji)酶MARK4抗體 SERPING1 Others Human 人 SERPING1 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

6-10B, 人鼻(bi)咽(yan)癌細(xi)胞(bao)系 大(da)鼠(shu)血(xue)管(guan)性(xing)血(xue)友病因(yin)子裂解(jie)酶(mei)(vWF-cp)ELISA試劑(ji)盒(he) ANG-2 (Rabbit Angiopoietin 2)  兔(tu)血(xue)管(guan)生(sheng)成(cheng)素2 96T

MEP1A： 苯(ben)肽(tai)水解(jie)酶(mei)抗體 小(xiao)鼠(shu)肝(gan)癌瘤株(zhu);H22

MDA-MB-175VII(人導管(guan)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 BRL 3A(大(da)鼠(shu)肝(gan)細胞(bao)) 大鼠(shu)血(xue)管(guan)性(xing)血(xue)友病因(yin)子裂解(jie)蛋(dan)白(bai)酶(mei)(vWFcp)ELISA試劑(ji)盒(he) Plant growth hormone,GH  植(zhi)物生(sheng)長(chang)激(ji)素 96T

phospho-MEK2(Thr394)： 0酸化(hua)原活化(hua)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶激酶2抗(kang)體(ti) SV40轉(zhuan)化(hua)的(de)非(fei)洲綠猴腎細(xi)胞(bao);COS-7

Balb/c小(xiao)鼠(shu)骨(gu)髓間(jian)質幹細胞(bao) Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells 人核(he)因(yin)子κB受體(ti)活化(hua)因(yin)子配(pei)基(ji)(RANKL)ELISA 試劑(ji)盒(he) ChRM3 peptide 毒(du)蕈堿型(xing)乙酰(xian)受體(ti)M3抗原 0.5mg

HS6ST1： 乙酰(xian)肝(gan)素6腦(nao)苷脂(zhi)轉酶(mei)1抗(kang)體(ti) 小(xiao)耳(er)豬腎細(xi)胞(bao);SEPfk 癌細(xi)胞(bao)，MDA-MB-468細胞(bao) WK256細胞(bao)，大鼠(shu)肉瘤細胞(bao)

CD302 Others Rat 大(da)鼠(shu) CD302 / CLEC13A 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 人核(he)因(yin)子κB(NF-κB)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) CK18(Cytokeratin 18) 細(xi)胞(bao)角蛋(dan)白(bai)18(多(duo)肽(tai)) 0.5mg

Humanin： 神(shen)經(jing)保護肽(tai)HN抗體(ti) CL-0186PIEC(豬髖動脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞(bao) )5×106cells/瓶×2

B16細(xi)胞(bao)，人黑(hei)色(se)素瘤細胞(bao) 植(zhi)物乳(ru)桿(gan)菌 白(bai)介(jie)素-2轉(zhuan)染耐(nai)VP16絨癌細(xi)胞(bao);JEG-3/VP16-IL-2 人核(he)糖核(he)酸酶(RNASE)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) CK18 peptide 細(xi)胞(bao)角蛋(dan)白(bai)18多(duo)肽(tai)抗原 0.5mg

J.gamma1人急(ji)性(xing)T細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病細胞(bao)M14 人黑(hei)色(se)素瘤細胞(bao) 大鼠(shu)高(gao)遷移(yi)率(lv)族(zu)蛋(dan)白(bai)B1(HMGB-1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) EG-VEGF  大(da)鼠(shu)內分泌(mi)腺來源(yuan)的血(xue)管(guan)內皮(pi)生(sheng)長(chang)因(yin)子 96T

PIRH2： 泛(fan)素連(lian)接酶抗體 NCI-H520[H520]細胞(bao)，人肺癌細(xi)胞(bao) 人膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao),EJ細胞(bao) 人心(xin)肌細(xi)胞(bao)HCM

CD300A Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD300A 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)高(gao)遷移(yi)率(lv)族(zu)蛋(dan)白(bai)1(HMGB1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Human echinococcus antibody IgG  人包蟲抗體 CM-R061大(da)鼠(shu)腎動(dong)脈(mai)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)100mL

MDA-MB-468人癌細(xi)胞(bao) Human breast cancer cell line MDA-MB-468 L-15+10%FBS 大鼠(shu)高(gao)遷移(yi)率(lv)族(zu)蛋(dan)白(bai)1(HMG1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) 1,3- BetaD-Glu  大(da)鼠(shu)1,3-βD葡(pu)葡糖苷酶(mei) 96T

PANK4： 泛(fan)酸激酶(mei)4抗體(ti) MMP9 Others Human 人 MMP-9 / CLG4B 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))