JF-305人胰腺(xian)癌細胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得(de)用於臨(lin)床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期保存。使(shi)用程序(xu)

降溫(wen)盒可直接放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培養(yang)凍存處理(li)僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨產品(pin)說明(ming)書為(wei)主。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸液的(de)凍存管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心3 min，棄去上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然後將所有細(xi)胞(bao)懸液加入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中培(pei)養過夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即可進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液浸潤所有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶置於(yu)37℃培養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞(bao)大部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培養瓶後加(jia)2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻後裝入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸液按1:2比(bi)例分到新的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍存：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存。下面(mian) T25 瓶為例；a、收(shou)集細胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心4 min，棄去上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據(ju)細胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存液，使細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每支凍存管凍存1mL細胞(bao)懸液，註意(yi)凍存管做(zuo)好標識。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌儲存(cun)。記錄凍存管位置以(yi)便下次拿(na)取。

三(san)、培養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完好，培養液是否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細胞(bao)說明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等，確(que)保細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問(wen)題，責任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運輸問(wen)題，部(bu)分細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎片，是正常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精(jing)消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混(hun)勻收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶用相同(tong)條(tiao)件的(de)培養(yang)基用於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收到細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸的(de)原因(yin)，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知細胞(bao) 的(de)具體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註：運輸用的(de)培養(yang)基 (灌液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培(pei)養細胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新配制的(de)培養(yang)基來培(pei)養細胞(bao)。     收到(dao)細胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正在出售的(de)產品(pin)：

phospho-MEK5(Ser142)： 0酸(suan)化(hua)原活(huo)化(hua)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)激酶5抗(kang)體(ti) 人胎(tai)兒胸腺(xian)細(xi)胞(bao)株;HFT-8810 [HFT8810]

Hs 746T人胃(wei)癌細胞(bao) Hs human gasic cancer cells 746T DMEM+10% FBS 大鼠(shu)血管(guan)性血(xue)友病因(yin)子(zi)/瑞(rui)斯(si)托輔(fu)因(yin)子(zi)(VWF)ELISA 試劑(ji)盒 大鼠(shu)c-jun  大鼠(shu)c-jun  96T

phospho-MEK5(Ser311+Thr315)： 0酸(suan)化(hua)原活(huo)化(hua)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)激酶5抗(kang)體(ti) SPARC Others Human 人 SPARC / Osteonectin 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

GBC-SD, 人膽(dan)囊(nang)癌細胞(bao) 大鼠(shu)血管(guan)性血(xue)友病因(yin)子(zi)(vWF)ELISA試劑(ji)盒 ESF(Human erythropoiesis stimulating factor)  人紅(hong)細胞(bao)刺(ci)激因(yin)子 96T

phospho-MEK5(Ser129)： 0酸(suan)化(hua)原活(huo)化(hua)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)激酶5抗(kang)體(ti) 615小(xiao)鼠(shu)前胃(wei)癌瘤株;Fc

ANGPTL4 Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠(shu) ANGPTL4 蛋白(bai) (His 標簽(qian)) 人還原(yuan)型(xing)(GSH)ELISA試劑(ji)盒 CK16(Cytokeratin 16) 細胞(bao)角蛋(dan)白16抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HIFPH4： 缺(que)氧誘導因子脯酰(xian)4羥化(hua)酶抗(kang)體(ti) FZD5 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Frizzled-5 / FZD5 CHO細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

人肺(fei)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)培養(yang)基 100mL 人過氧化(hua)脂質/乳過氧化(hua)物酶(mei)(LPO)ELISA 試劑(ji)盒 CK17(Cytokeratin 17) 細胞(bao)角蛋(dan)白17抗(kang)原(yuan) 0.5mg

Hyaluronidase2： 透(tou)明(ming)質酸(suan)酶2/2抗(kang)體(ti) 小(xiao)耳豬(zhu)肺(fei)細胞(bao);SEP-L1 癌細胞(bao)，MDA-MB-435S細胞(bao) MA891細胞(bao)，小(xiao)鼠(shu)癌細胞(bao)

CD5 Others Rat 大鼠(shu) CD5 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 人過氧化(hua)物酶(mei)體(ti)增殖因子活(huo)化(hua)受(shou)體γ(PPARγ)ELISA 試劑(ji)盒 CK1/8/19 (Cytokeratin1/8/19; Keratin 1/8/19)peptide 細胞(bao)角蛋(dan)白1/8/19抗(kang)原(yuan) 0.5mg

JF-305人胰腺(xian)癌細胞(bao)PMCA4B： 細(xi)胞(bao)膜鈣(gai)ATP酶4B抗(kang)體(ti) HA Others H7N9 甲型(xing)流(liu)感(gan) H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血(xue)凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

M17 神經(jing)母(mu)細胞(bao)瘤 大鼠(shu)高敏(min)甲狀(zhuang)腺(xian)素(su)(u-T4)ELISA試劑(ji)盒 E-Cad  大鼠(shu)E鈣黏蛋白(bai)/上皮鈣(gai)黏蛋白(bai) 96T

PMCA： 細(xi)胞(bao)膜鈣(gai)轉(zhuan)運ATP酶(mei)抗(kang)體(ti) NCI-H1703[H1703]細(xi)胞(bao)，人肺(fei)癌細胞(bao) 人膀胱(guang)癌細胞(bao),5637(HTB-9)細胞(bao) 人視網(wang)膜色(se)素(su)上(shang)皮細胞(bao)HRPEpiC

CA10 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Ca10 / Car10 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 大鼠(shu)高敏(min)甲狀(zhuang)腺(xian)素(su)(u-T4)ELISA 試劑(ji)盒 Human Coronaviruses IgG  人流行(xing)性(xing)乙(yi)型(xing)腦(nao)炎抗(kang)體(ti) CM-R053大鼠(shu)卵(luan)巢(chao)上皮細(xi)胞(bao)培養(yang)基100mL

ZR-75-1人癌細胞(bao) Human breast cancer cell line ZR-75-1 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)高密度脂蛋白(HDL-C)ELISA試劑(ji)盒 BTC  大鼠(shu)β細胞(bao)素(su) 96T