KNS-89人腦(nao)膠(jiao)質細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基重懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分瓶傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹打細(xi)胞(bao)使之脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期保(bao)存(cun)。使用程序(xu)

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明(ming)書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解凍，加4 mL培(pei)養基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入含適量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清，用不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸潤所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例分到新的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存液，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意凍存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿取(qu)。

三、培(pei)養註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完好，培(pei)養液是否(fou)有漏液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上述現象 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面，顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現象。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基重懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同條件(jian)的(de)培(pei)養基用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司技術(shu)部溝通(tong) 交流。由於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個(ge)別敏(min)感細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我們(men)的(de)技術(shu)人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直至問題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按(an)照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件(jian)新配制(zhi)的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次傳代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正(zheng)在出售的(de)產品(pin)：

GDNF Others Human 人(ren) GDNF 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 大(da)鼠血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)生長(chang)因(yin)子C(VEGF-C)ELISA試劑盒(he) Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA  菜(cai)豆(dou)凝(ning)集素(su) 96T

MEPE： 細(xi)胞(bao)外基質0酸化(hua)抗(kang)體 人(ren)絨毛間(jian)葉成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)RNAHVMF miRNA5 μg

MKN-45人(ren)胃(wei)癌細(xi)胞(bao) Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBS 大(da)鼠血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)生長(chang)因(yin)子C(VEGF-C)ELISA 試劑盒(he) Ep-CAM/CD362(Human Epithelial Cell Adhesion Molecule)  人(ren)上皮細(xi)胞(bao)粘附(fu)分(fen)子 96T

Mast Cell Tryptase： 肥大(da)細(xi)胞(bao)蛋(dan)白(bai)酶7抗(kang)體 DKK1 Others Rhesus 恒(heng)河猴(hou) DKK-1 / Dkk1 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

MGC80-3(MGC-803)人(ren)胃(wei)癌細(xi)胞(bao) 大(da)鼠血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)生長(chang)因(yin)子B(VEGF-B)ELISA試劑盒(he) IL-32  大(da)鼠白(bai)介素(su)32 96T

ANGPT4 Protein Human 重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽) 人谷(gu)酸脫羧酶自(zi)身(shen)抗(kang)體(GAD-Ab)ELISA 試(shi)劑盒(he) CTBP1(C-terminal binding protein 1) C端(duan)結合蛋(dan)白(bai)1抗(kang)原 0.5mg

HRH4： 組織胺(an)H4受體抗(kang)體 ADAM15 Others Human 人(ren) ADAM15 CHO細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人(ren)肺泡上皮細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 人(ren)谷(gu)酸脫羧酶(GAD)ELISA 試(shi)劑盒(he) CTLA-4/CD152 淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)相(xiang)關抗(kang)原4/細(xi)胞(bao)毒性(xing)T細(xi)胞(bao)抗(kang)原-4 0.5mg

HSD11B2： 羥(qiang)基類固醇脫(tuo)氫(qing)酶11β2抗(kang)體 鼬(you)肺上皮細(xi)胞(bao);MV-1-Lu 胰(yi)腺(xian)癌細(xi)胞(bao)，PANC-1細(xi)胞(bao) 3T3 clone A31細(xi)胞(bao)，小鼠胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)

CN3 Others Rat 大(da)鼠 Coactin 3 / CN3 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 人谷(gu)酸脫氫酶(GDH)ELISA 試(shi)劑盒(he) CTn1 (cardiac troponin 1) 心(xin)肌(ji)肌(ji)鈣蛋(dan)白(bai) 0.5mg

KNS-89人(ren)腦膠(jiao)質細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)PRKD3： 蛋(dan)白(bai)激(ji)酶C nu型(xing)抗(kang)體 CM-R005大(da)鼠氣(qi)管(guan)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養基100mL

HFL1人(ren)胚(pei)肺成纖維(wei)細(xi)胞(bao) HFL1 in human embryo lung fibroblasts F12K培(pei)養基+10%FBS 大(da)鼠肝(gan)素(su)結合性(xing)表皮(pi)生長(chang)因(yin)子(HBEGF)ELISA試劑盒(he) VZV-IgG(Human Varicella zoster virus IgG)  人(ren)水(shui)痘帶(dai)狀(zhuang)皰疹(zhen)病毒(du)IgG 96T

phospho-PRKD3(Ser41)： 0酸化(hua)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶C nu型(xing)抗(kang)體 CSF1R Others Human 人(ren) M-CSFR 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

小鼠骨(gu)髓細(xi)胞(bao);FDC-P1 大(da)鼠肝(gan)素(su)結合EGF樣生(sheng)長(chang)因(yin)子(HBEGF)ELISA試劑盒(he) PGF  大(da)鼠前(qian)列(lie)腺(xian)素(su)F 96T

phospho-PIK3C3(Ser282)： 0酸化(hua)0脂(zhi)酰肌醇(chun)激(ji)酶3催(cui)化(hua)亞(ya)單(dan)位(wei)3抗(kang)體 牛(niu)腎細(xi)胞(bao);MDBK