LLC+LUC小(xiao)鼠(shu)肺癌細(xi)胞(bao)熒光素(su)酶(mei)標(biao)記(ji)

公司產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸，然後按(an) 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加入培養(yang)液終(zhong)

止消化，輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於(yu)凍存管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)中進行長(chang)期保存。使用(yong)程序

降溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培養(yang)凍存處理僅供(gong)參考，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以隨貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍存管在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然後將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液加入含適量培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天換液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可進行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使消化液浸潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化。輕輕(qing)打勻(yun)後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待細(xi)胞(bao)生長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可進行細(xi)胞(bao)凍存。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意凍存管做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取(qu)。

公司正在(zai)出售的(de)產(chan)品(pin)：

Nkx2.5： 心(xin)臟特異(yi)性(xing)同(tong)源(yuan)盒轉(zhuan)錄因子NKX2.5抗(kang)體(ti) CCL17 Others Human 人(ren) CCL17 / TARC / SCYA17 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

小(xiao)鼠(shu)皮膚肥(fei)大細(xi)胞(bao)培養(yang)基 100mL 大鼠(shu)乳(ru)鐵傳遞蛋白(LTF)ELISA試(shi)劑盒 BNP(Human brain natriuretic peptide)  人(ren)腦(nao)素(su)/腦(nao)尿(niao)肽 96T

Noggin： 指(zhi)(趾(zhi))關(guan)節粘(zhan)連NOG蛋(dan)白抗(kang)體(ti) HeLa[Chang Liver]細(xi)胞(bao)，張氏(shi)肝(gan)細(xi)胞(bao) 人(ren)結腸癌細(xi)胞(bao),HRT-S1細(xi)胞(bao) CM-R069大鼠(shu)腎成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)培養(yang)基100mL

ADCYAP1R1 Others Human 人(ren) ADCYAP1R1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大鼠(shu)乳(ru)酸(suan)脫氫(qing)酶B(LDHB)ELISA試劑盒 Kim-1(Mouse Kidney injury molecule 1)  小(xiao)鼠(shu)腎損(sun)傷(shang)分子1 96T

NSBP1： 核小(xiao)體(ti)結合蛋白1抗(kang)體(ti) 人(ren)肝(gan)星(xing)形(xing)細(xi)胞(bao)HHSteC

ADM2： 中(zhong)介(jie)素抗體(ti) MMP8 Others Human 人(ren) MMP8 / CLG1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)食(shi)道(dao)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)RNAHESMC miRNA5 μg 人(ren)Ⅲ型(xing)前(qian)膠(jiao)原肽(PⅢNP)ELISA 試劑盒 B7-H4 B7-H4(抗原) 0.5mg

IkB beta： NF-kappa-B抑制子beta抗(kang)體(ti) 人(ren)急(ji)性(xing)T淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao);Jurkat, Clone E6-1

SW626(人(ren)卵(luan)巢(chao)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 甲(jia)型流(liu)感(gan) H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 人(ren)Ⅲ型(xing)前(qian)膠(jiao)原肽(PⅢNP)ELISA 試劑盒 BADH2 (Betaine-aldehyde dehydrogenase ) BADH2抗原 0.5mg

IRF6： 幹(gan)擾(rao)素調節因子6抗(kang)體(ti) 晶(jing)狀體(ti)上(shang)皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次方(1ml)

LLC+LUC小(xiao)鼠(shu)肺癌細(xi)胞(bao)熒光素(su)酶(mei)標(biao)記(ji)RASSF1A： Ras相(xiang)關(guan)區(qu)域家族(zu)1A抗體(ti) TSPAN7 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) TALLA-1 / TSPAN7 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

CCD-18Co 正(zheng)常(chang)人(ren)結腸組(zu)織細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)白介(jie)素(su)18(IL-18)ELISA試劑盒 GSK(Human glycogen synthase kinase)  人(ren)糖(tang)原合成(cheng)酶(mei)激(ji)酶(mei) 96T

Resistin： 抵(di)抗(kang)素抗體(ti) CV-1(M)細(xi)胞(bao)，非洲(zhou)綠(lv)猴腎細(xi)胞(bao) 人(ren)正(zheng)常(chang)前(qian)列(lie)腺上(shang)皮細(xi)胞(bao),RWPE-1細(xi)胞(bao) 人(ren)臍(qi)靜脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao);HUV-EC-C

FLT1 Others Human 人(ren) FLT1 / VEGFR1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大鼠(shu)白介(jie)素(su)18(IL-18)ELISA試劑盒 Casp-9(Human Caspase-9)  人(ren)胱天蛋(dan)白酶(mei)9 96T

RhoA： RhoA抗(kang)體(ti) EB病(bing)毒(du)轉化的人(ren)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);KMY0908

三、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完好(hao)，培養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液、渾濁等現象，若有上(shang)述(shu)現象 發生請及時和我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責任(ren)由(you) 客(ke)戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運輸問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度 變化及劇烈碰(peng)亡破碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化，懸浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相同(tong)條(tiao)件的培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和我司技術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩(wen)定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們的(de)技術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用(yong)的培養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制的(de)培養(yang)基來培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。