LN229人(ren)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞

公司(si)產(chan)品(pin)僅供科研研究使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化，再(zai)輕輕吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後按 1:2 比例進行分瓶傳代，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加入培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細胞培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供參考，具體操作步(bu)驟以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將含(han)有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然後將所(suo)有細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳代：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進行傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細胞，將培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然後在顯微鏡(jing)下觀(guan)察細胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細胞大部分(fen)變圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例分到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞計數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量(liang)加入無血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿取(qu)。

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到細胞後首先(xian)觀(guan)察細胞瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現象，若有上(shang)述現象 發生(sheng)請及時(shi)和我(wo)們聯系。

2. 仔細閱讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書，了解細胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需(xu) 細胞因子(zi)等，確保細胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶(ping)表面，顯微鏡(jing)下觀(guan)察細胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化及劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形成碎片，是正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞後前 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便於和我(wo)司技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因，個(ge)別敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現不穩定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及時(shi)和我(wo)們聯系，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤回訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該細胞僅供科研使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用來培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配制(zhi)的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細胞後第壹次傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

大鼠(shu)海馬神(shen)經元細胞培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠(shu)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞生(sheng)長(chang)因子(zi)(VEGF)ELISA 試劑(ji)盒(he) Lens culinaris agglutinin,LCA  扁豆(dou)凝集(ji)素 96T

MBOAT4： 腦腸肽(tai)O酰基轉(zhuan)移(yi)酶(mei)抗體 A-375[A375]細胞，惡(e)性(xing)黑色(se)素瘤(liu)細胞 白(bai)血(xue)病細胞,Jurk. Clone E6-1細胞 人(ren)皮(pi)膚(fu)鱗癌(ai)細胞;A-431 [A431]

B2M Others Rat 大鼠(shu) B2M / Beta-2-microglobulin 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 大鼠(shu)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞生(sheng)長(chang)因子(zi)(VEGF)ELISA 試劑(ji)盒(he) Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2  小鼠(shu)Qa淋巴(ba)細胞抗原(yuan)2 96T

MRG15： 轉(zhuan)錄調控(kong)因子(zi)MRG15抗體 人(ren)視(shi)網(wang)膜色(se)素上皮(pi)細胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg

MDCK(NBL-2)狗(gou)腎細胞 MDCK (NBL-2) dog kidney cells MEM(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞蛋(dan)白(bai)C受體(PROCR)ELISA試劑(ji)盒(he) PROGR  大鼠(shu)孕酮(tong)受體 96T

L1210(小鼠(shu)白(bai)血(xue)病(bing)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠(shu) IL1RL1 / ST2 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 人(ren)過(guo)氧(yang)化酶(mei)(GSH-Px)ELISA 試劑(ji)盒(he) Cx40 (Connexin-40) 間隙連接(jie)蛋(dan)白(bai)40(多肽(tai)) 0.5mg

HAPLN1： 透(tou)明(ming)質酸(suan)及粘蛋(dan)白(bai)1抗體 人(ren)食(shi)道平滑(hua)肌細胞裂解物(wu)HESMCL

ANGPTL4 Protein Human 重組人(ren) ANGPTL4 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽) 人(ren)S轉(zhuan)移(yi)酶(mei)(GSTs)ELISA 試劑(ji)盒(he) cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1) 趨(qu)化因子(zi)(C-X3-C 基元)配體1抗原(yuan) 0.5mg

HES7： 轉(zhuan)錄因子(zi)HES7抗體 HGF Others Human 人(ren) HGF / Hepatocyte Growth Factor CHO細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

人(ren)氣(qi)管(guan)上皮(pi)細胞培(pei)養(yang)基 100mL 人(ren)(GSH)ELISA 試劑(ji)盒(he) CX3CR1(CX3C-chemokine receptor 1) CX3C趨(qu)化因子(zi)受(shou)體1抗原(yuan) 0.5mg

LN229人(ren)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞Calu-6人(ren)退行性(xing)癌細胞 Calu-6 human degenerative cancer cells MEM培(pei)養(yang)基(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)肝(gan)腎骨堿(jian)性(xing)0酸酶(mei)(ALPL)ELISA試劑(ji)盒(he) CORT  大鼠(shu)皮(pi)質(zhi)酮(tong)/腎上腺(xian)酮(tong) 96T

PHEX： 維生低0性(xing)佝(gou)僂(lou)病(bing)蛋(dan)白 0.2ml

Rhesus antibody Rh KCNC3/Kv3.3 離子通道蛋白(bai)Kv3.3抗體 CSF1R Others Human 人(ren) M-CSFR 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

人(ren)肺(fei)支(zhi)氣(qi)管(guan)癌細胞;NCI-H1650 大鼠(shu)肝(gan)配蛋(dan)白B受(shou)體3(EPHB3)ELISA試劑(ji)盒(he) Human paramyxovirus parotitis IgM  人(ren)腮(sai)腺(xian)炎病(bing)毒(du)IgM 96T

PTCHD2： 多通(tong)道膜蛋(dan)白(bai)PTCHD2抗體 牛(niu)腎細胞;MDBK(NBL-1)