U87MG+RFP人(ren)腦(nao)星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細胞(bao)瘤+RFP

公司產品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生長至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生長至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培(pei)養液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍存(cun)管中；

4）先將細胞(bao)凍存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使用程序(xu)

降溫(wen)盒可直接放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下細胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理(li)僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟以隨(sui)貨產品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天換液並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清，用不含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤所(suo)有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌離心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶(ping)中，置於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入無(wu)菌離心管中，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄去(qu)上清液，用PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根據細胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清細胞(bao)凍存(cun)液，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置以便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：

NBL1 Others Mouse 小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 大鼠生長分化(hua)因(yin)子(zi)15(GDF-15)ELISA試(shi)劑盒 HK  大鼠己糖激(ji)酶 96T

Phospho-NMDAR2B (Tyr1474)： 0酸(suan)化(hua)谷(gu)酸(suan)受(shou)體(ti)2B抗體 神(shen)經前(qian)體(ti)細胞(bao)分化(hua)培(pei)養基(ji)NPCM

C127小鼠細胞(bao) C127 mouse mammary tumor cells DMEM培(pei)養基(ji)+10%FBS 大鼠生長分化(hua)因(yin)子(zi)15(GDF15)ELISA試(shi)劑盒 P-Selectin/CD62P(Mouse P-Selectin)  小鼠P選(xuan)擇素(su) 96T

Phospho-NFKB1 (Thr931)： 0酸(suan)化(hua)細胞(bao)核(he)因子(zi)p50/k基(ji)因結合(he)核(he)因子(zi)抗體 SCARB1 Others Human 人(ren) SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

CM-M086小鼠真皮成纖(xian)維(wei)細胞(bao)培(pei)養基(ji)100mL 大鼠生長分化(hua)因(yin)子(zi)11(GDF11)ELISA試(shi)劑盒 ALCAM(Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule)  人(ren)白細胞(bao)活化(hua)黏(nian)附因子(zi) 96T

Hepa 1-6細胞(bao)，小(xiao)鼠肝(gan)癌細胞(bao) PC-12(腎(shen)上腺嗜鉻細胞(bao)瘤細胞(bao)) EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的(de)人(ren)B淋(lin)巴細胞(bao);KMY0923 人(ren)P選(xuan)擇素(su)(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA 試(shi)劑盒 AKAP12A/SSeCKS peptide 絲酸(suan)抑制(zhi)蛋(dan)白激(ji)酶C底物(wu)抗原 0.5mg

Integrin beta 3： 整合素β3抗體 REG1B Others Human 人(ren) REG1B / PSPS2 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人(ren)胚肺成纖(xian)維(wei)細胞(bao);MRC-5 人(ren)P物(wu)質受(shou)體(ti)(SP-R)ELISA 試(shi)劑盒 Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1) 階段特(te)異(yi)性(xing)胚胎表面抗原-1抗原 0.5mg

Integrin alpha 4/CD49d/Integrin α4： 整合素α4抗體 人(ren)皮膚(fu)黑色素瘤細胞(bao);SK-MEL-1

SK-Hep-1(人(ren)肝(gan)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 狗(gou) IL17RD 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 人(ren)p物(wu)質(SP)ELISA 試(shi)劑盒 SSTR1 (somatostatin receptor 1) 受(shou)體(ti)1(SSTR1)抗原 0.5mg

U87MG+RFP人(ren)腦(nao)星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細胞(bao)瘤+RFPRAD54B： DNA修復和重組蛋(dan)白(bai)RAD54B抗體 MM, 小(xiao)鼠小膠(jiao)質細胞(bao)

MEF, 小鼠胚胎成纖(xian)維(wei)細胞(bao) 大鼠白介(jie)素6(IL-6)ELISA試(shi)劑盒 TH(Human tyrosine hydroxylase)  人(ren)酪酸(suan)羥化(hua)酶 96T

RRAS2： 畸胎(tai)瘤癌基因(yin)RAS相(xiang)關(guan)病毒(du)抗體 IFNA13 Others Mouse 小(xiao)鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

BABL/C2 BABL/C小鼠胚胎細胞(bao) 大鼠白介(jie)素6(IL-6)ELISA試(shi)劑盒 DDC(Human dopamine decarboxylase)  人(ren)多巴(ba)胺(an)脫羧酶 96T

RASA3： Ras-GTP酶激(ji)活蛋白(bai)3抗體 MDA-MB-157細胞(bao)，癌(ai)細胞(bao) 人(ren)胎盤(pan)絨(rong)膜(mo)癌細胞(bao),BeWo細胞(bao) 人(ren)肺動(dong)脈(mai)內(nei)皮細胞(bao)RNAHPASMC miRNA5 μg

三、培(pei)養註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及時(shi)和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清比(bi)例(li)、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子(zi)等，確保(bao)細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培(pei)養條(tiao)件不壹(yi)致而導致細胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞(bao)直接混(hun)勻收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中，置於培(pei)養箱中進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條件的培(pei)養基(ji)用於細胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客(ke)戶收(shou)到細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各拍幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和我(wo)司技術部溝(gou)通(tong) 交流。由於運輸(shu)的原因(yin)，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及時(shi)和我(wo)們聯系(xi)，告知細胞(bao) 的(de)具體(ti)情(qing)況，以便我(wo)們的(de)技(ji)術人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再用來培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換用按(an)照說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。