RT4人(ren)膀胱(guang)移(yi)行細胞乳(ru)頭(tou)瘤

公司產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研究使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋培養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液終止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培養基重懸，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養箱(xiang)中培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋培養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養液終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放置於凍存管(guan)中；

4）先將(jiang)細胞凍存管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中進行(xing)長(chang)期保(bao)存。使用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養凍存處(chu)理僅供參(can)考，具體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸液(ye)的凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培養基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所有(you)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培養基的培養瓶中培養過夜（或將(jiang)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養基，培養過夜）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養。

a、棄去培養上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培養瓶置於37℃培養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而(er)定），然後在顯(xian)微鏡(jing)下觀察細胞消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培養瓶後加(jia)2-3ml培養基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打(da)勻(yun)後裝入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培養基的新(xin)皿中或者(zhe)瓶中，置於培養箱(xiang)中培養。 3) 細胞凍存：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞凍存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞及細胞培養液，裝入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍存液，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每支凍存管(guan)凍存1mL細胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存管(guan)做好標識。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲存。記錄(lu)凍存管(guan)位置以便(bian)下次(ci)拿取(qu)。

三(san)、培養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到細胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶是否完好(hao)，培養液是否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象 發生(sheng)請及時和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相關(guan)信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所用(yong)培養基、血清(qing)比例、所需 細胞因(yin)子等，確保(bao)細胞培養條件壹(yi)致，若(ruo)由於培養條件不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致(zhi)細胞出現問題，責(ze)任由 客戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下觀察細胞狀態。因(yin)運輸(shu)問題，部分(fen)細胞由於溫度 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎形(xing)成碎片，是正常現象(xiang)。觀察好細胞狀態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可(ke)以消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的培養基重懸 細胞，並接(jie)種到新(xin)的培養瓶或培養皿中，置於培養箱(xiang)中進行(xing)培養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件的培養基用於細胞培養。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細胞後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張細胞照片，記錄(lu)細胞狀態，便於和我(wo)司技術(shu)部溝通 交(jiao)流。由於運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細胞會出現不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請及時和(he)我(wo)們聯系，告(gao)知細胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我(wo)們的技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤回訪(fang)直(zhi)至問題解決。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的培養基 (灌(guan)液培養基) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培養細胞，請換(huan)用按照說明書細胞培 養條件新配(pei)制的培養基來培養細胞。     收到細胞後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公司正在出售的產(chan)品(pin)：

NCKAP1L： 造血蛋白1抗(kang)體(ti) 二氫(qing)還原(yuan)酶缺陷(xian)型(xing)中國(guo)倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-

人(ren)表皮(pi)淋(lin)巴(ba)內管(guan)皮(pi)細胞(HDLEC)(5×105) 人(ren)星形(xing)膠(jiao)質(zhi)細胞 Human 大鼠(shu)Ⅻ(FⅫ)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 15-LO/LOX  大鼠(shu)15脂加(jia)氧(yang)酶(mei) 96T

Nidogen2： 骨(gu)巢蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti) 大鼠(shu)胚胎心肌細胞;H9c2(2-1)

IL21 Protein Rat 重(zhong)組大鼠 IL21 / Ierleukin 21 蛋白 (His 標簽) 大(da)鼠(shu)Ⅻ(F12)ELISA試劑(ji)盒(he) AMA(Mouse Anti-myocardial antibody)  小鼠(shu)抗心肌抗體(ti) IL9 Others Human 人(ren) IL-9 / Ierleukin-9 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照)

(含(han)10mL 酶解緩沖(chong)液(ye)) 1mL 大鼠Ⅺ(F11)ELISA試劑(ji)盒(he) BAX(Human Bcl-2 associated X protein)  人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白(bai) 96T

Jagged1： CD339抗(kang)體(ti) EPHA2 Others Human 人(ren) EphA2 (aa 585-976) 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照)

人(ren)內臟(zang)脂(zhi)肪(fang)細胞培養基 100mL 禽腦脊(ji)髓炎(yan)(AE)ELISA 試劑(ji)盒(he) OPGL (Osteoprotegerin ligand) 骨保(bao)護(hu)蛋(dan)白配(pei)體(ti)(抗原(yuan)) 0.5mg

JAM1： 連(lian)接(jie)粘(zhan)附分(fen)子1抗(kang)體(ti) mRTEC, 小鼠(shu)腎(shen)小(xiao)管(guan)上(shang)皮(pi)細胞 小鼠(shu)胰腺癌beta細胞，Beta-TC-6細胞 EB (NBL-4)(牛胚氣管(guan)細胞)

TNFRSF11A Others Rat 大(da)鼠 TNFRSF11A 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照) 禽白血(xue)病(bing)J亞(ya)型(xing)(ALV-J)ELISA試劑(ji)盒(he) P311 protein 增生(sheng)性(xing)瘢痕(hen)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

Jun D： 活(huo)化(hua)蛋(dan)白激(ji)酶D抗體(ti) 小鼠(shu)神(shen)經母細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]

RT4人(ren)膀胱(guang)移(yi)行細胞乳(ru)頭(tou)瘤RCC1： 染(ran)色體(ti)濃(nong)縮(suo)調控蛋白1抗(kang)體(ti) CL-0237U251(人(ren)膠(jiao)質(zhi)瘤細胞)5×106cells/瓶×2

MCF-7(MCF7)(ATCC來(lai)源), 人(ren)癌細胞 大鼠(shu)α1-微(wei)球蛋白(α1M)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) COLEC11(Human collectin sub-family member 11)  人(ren)集蛋(dan)白亞(ya)家族成員11 96T

Phospho-RCC1 (Ser11)： 0酸化(hua)染(ran)色(se)體(ti)濃(nong)縮(suo)調控蛋白1抗(kang)體(ti) TSPAN7 Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴 TALLA-1 / TSPAN7 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照)

GPS5 豚(tun)鼠皮(pi)膚(fu)成纖(xian)維(wei)樣細胞 大鼠(shu)α1酸性(xing)糖蛋(dan)白(bai)(α1-AGP)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Serpina3g(Human serine/cysteine peptidase inhibitor clade A member 3G)  人(ren)絲酸蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑制因(yin)子肽酶(mei)抑制因(yin)子進(jin)化枝(zhi)3G 96T

RPS6： S6核(he)糖體(ti)蛋白(bai)抗(kang)體(ti) MM96L細胞，黑(hei)色(se)素瘤細胞 人(ren)急性(xing)成髓細胞白血(xue)病(bing),Kasumi-1細胞 人(ren)導(dao)管(guan)瘤細胞;BT-474